四种猪冠状病毒多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用

发布时间：2021-10-29 19:22

　　猪传染性胃肠炎病毒（Transmissible gastroenteritis virus,TGEV）、猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）、猪血凝性脑脊髓炎病毒（Porcine hemmagglutinatipg encephalomyelitis virus,PHEV）及猪丁型冠状病毒（Porcine deltacoronavirus,PDCoV）均属于冠状病毒科冠状病毒属,在临床上都可引起仔猪的水样腹泻和呕吐等症状,且致死率较高,给养猪业造成严重的经济损失。越来越多的研究表明,这四种病毒在临床上常呈混合感染,为疾病的鉴别诊断带来巨大的挑战。目前,对上述病毒建立的检测方法多数是针对单一病毒,联合检测方法较少。考虑到四种病毒都是从形态学上无法区分的冠状病毒,而且感染仔猪的临床特征有一定的相似性,因此本研究从鉴别诊断方法入手,建立了可同时检测和区分四种仔猪易感冠状病毒的多重RT-PCR检测方法,并初步用于临床样本检测,对于该类病原感染的早期疫情诊断和流行病学调查具有重要意义。研究取得如下结果:根据GenBank上发表的四种冠状病毒... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
中文摘要
abstract
符号及缩略语说明
引言
第一篇 文献综述
    1 猪传染性胃肠炎病毒的概述
        1.1 猪传染性胃肠炎及猪传染性胃肠炎病毒的研究进展
        1.2 猪传染性胃肠炎病毒检测技术研究进展
    2 猪流行性腹泻病毒概述
        2.1 猪流行性腹泻及猪流行性腹泻病毒的研究进展
        2.2 猪流行性腹泻病毒检测技术研究进展
    3 猪血凝性脑脊髓炎病毒研究进展
        3.1 猪血凝性脑脊髓炎及猪血凝性脑脊髓炎病毒的研究进展
        3.2 猪血凝性脑脊髓炎病毒检测技术研究进展
    4 猪丁型冠状病毒研究进展
        4.1 猪丁型冠状病毒病及猪丁型冠状病毒病毒的研究进展
        4.2 猪丁型冠状病毒病毒检测技术研究进展
第二篇 实验内容
    第一章 四种冠状病毒单一RT-PCR检测方法的初步建立
        1.1 材料
            1.1.1 病毒和毒株
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 主要仪器
        1.2 方法
            1.2.1 引物的设计与合成
            1.2.2 样品及模板制备
            1.2.3 单一RT-PCR反应
            1.2.4 RT-PCR扩增产物的纯化和回收
            1.2.5 连接和转化
            1.2.6 阳性重组质粒的鉴定及PCR鉴定
            1.2.7 单一RT-PCR反应的灵敏性实验
            1.2.8 单一RT-PCR反应的特异性实验
        1.3 结果
            1.3.1 单一RT-PCR退火温度确定
            1.3.2 单一RT-PCR方法中引物浓度确定
            1.3.3 单一RT-PCR反应的灵敏性实验
            1.3.4 单一RT-PCR反应的特异性实验
        1.4 讨论
        1.5 小结
    第二章 猪四种冠状病毒的多重RT-PCR检测方法的建立及初步应用
        2.1 材料
            2.1.1 菌株及毒株
            2.1.2 待检临床样品
            2.1.3 主要试剂
        2.2 方法
            2.2.1 二重RT-PCR方法的退火温度的优化
            2.2.2 三重RT-PCR方法的扩增及退火温度的优化
            2.2.3 四种病毒的四重RT-PCR检测方法的建立及初步应用
        2.3 结果
            2.3.1 二重RT-PCR方法的退火温度的优化
            2.3.2 三重RT-PCR方法的退火温度的优化
            2.3.3 四重RT-PCR检测方法的建立及初步应用
        2.4 讨论
        2.5 小结
第三篇 结论
参考文献
导师简介
个人简介
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪传染性胃肠炎病毒间接免疫荧光检测方法的建立[J]. 朱蕴暖,张鑫,朱向东,陈建飞,时洪艳,石达,王鑫,季朝阳,冯力.  中国兽医科学. 2017(01)
[2]同时检测PEDV和TGEV及PDCoV的多重RT-PCR方法的建立及初步应用[J]. 任玉鹏,张斌,汤承,曹恭貌,岳华.  中国兽医科学. 2016(06)
[3]猪德尔塔冠状病毒感染的防控[J]. 万遂如.  养猪. 2016(02)
[4]新现猪Delta冠状病毒RT-PCR检测方法的建立及其应用[J]. 张帆帆,宋德平,周信荣,黄冬艳,李安琪,彭棋,陈燕君,吴琼,何后军,唐玉新.  中国农业科学. 2016(07)
[5]猪δ冠状病毒的研究进展[J]. 方谱县,方六荣,董楠,肖少波.  病毒学报. 2016(02)
[6]猪传染性脑脊髓炎的鉴别诊断及防治措施[J]. 赵宏涛,严飞,刘亚辉.  畜牧与饲料科学. 2015(05)
[7]猪传染性胃肠炎病毒S基因主要抗原位点A和D的原核表达及间接ELISA检测方法的建立[J]. 牟春晓,朱立麒,邢宪平,杨倩.  中国兽医科学. 2015(04)
[8]猪腹泻病例中PEDV、TGEV及PRV的感染调查[J]. 孙振钊,赵伟男,王靖飞.  动物医学进展. 2014(05)
[9]猪血凝性脑脊髓炎病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及山东省猪血清抗体检测分析[J]. 刘立卓,赵家宽,贺文琦,兰云刚,吕晓玲,王桂花,常灵竹,赵魁,高丰,成子强,靳朝.  中国兽医学报. 2014(05)
[10]猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒和猪博卡病毒多重PCR检测方法的建立[J]. 焦洋,姜焱,王凯民,张常印,雷治海,唐泰山.  动物医学进展. 2013(08)

硕士论文
[1]猪血凝性脑脊髓炎病毒双抗夹心ELISA抗原检测试剂盒的研制与应用[D]. 尹洋.吉林大学 2017
[2]一起猪血凝性脑脊髓炎的诊断[D]. 张月香.吉林大学 2016
[3]内蒙古猪传染性胃肠炎流行病学调查及猪传染性胃肠炎病毒S基因序列分析[D]. 李静.内蒙古农业大学 2016
[4]猪流行性腹泻病毒的流行病学调查及快速检测方法的初步建立[D]. 赵振鹏.扬州大学 2016
[5]猪传染性胃肠炎病毒LJ-12株的分离及鉴定[D]. 姜春霞.东北农业大学 2013
[6]猪传染性胃肠炎病毒M基因的克隆、表达及ELISA抗体检测方法的建立[D]. 张小波.河北农业大学 2010



本文编号：3465257