eEF1A1介导鹿茸来源的MicroRNA PC-3p-2869调控骨肉瘤细胞增殖、迁移与侵袭
发布时间：2021-10-29 21:11
为探索快速生长期马鹿（Cervus elaphus）鹿茸生长点软骨中新发现的低拷贝microRNAPC-3p-2869的生物学功能。本研究利用microRNAPC-3p-2869的预测靶标,参与肽链延伸、蛋白质翻译后修饰、细胞骨架调节、细胞周期、生长和死亡调控等,同时在真核细胞中高度保守的GTP结合蛋白eEF1A1（真核翻译延伸因子1A1）进行验证。通过荧光素酶报告系统、定量逆转录PCR以及western blot实验研究microRNA PC-3p-2869对eEF1A1的调控作用,同时采用细胞增殖、迁移和侵袭实验研究microRNA PC-3p-2869对细胞生理功能的影响。结果显示:（1）当microRNA PC-3p-2869 mimics与eEF1A1 3’UTR野生型重组质粒共转染293T细胞系时,相较于其他实验组,本组的荧光素酶的表达量明显下降。（2）当 microRNA PC-3p-2869 mimics 和 NC mimics（negative control mimics,NC）分别转染MG63细胞系时,western blot实验检测microRNA PC-3p-...
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２?ｍｉｃｒｏＲＮＡ的产生和加工过程［７４１??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ?ｏｆ?ｍｉｃｒｏＲＮＡ１７４１??
?东北林业大学硕士学位论文???预测或筛选ｍｉｃｒｏ?ＲＮ?Ａ结合位点??Ｃ??＞?ｆ??ｍｉＲＮＡ／ｍＲＮＡ互作关系??．??外源ｍｉＲＮＡ和?ｍｉＲＮＡ对耙标?ｍｉＲＮＡ对细胞??ｍＲＮＡ共转?蛋白的影响?功能的影响??图１－４?ｍｉｃｒｏＲＮＡ功能验证流程图??Ｆｉｇ?１－４?Ｐｒｏｐｏｓｅｄ?ｆｌｏｗ?ｄｉａｇｒａｍ?ｆｏｒ?ｍｉｃｒｏＲＮＡ?ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ??１．６?ＭｉｃｒｏＲＮＡ的异源表达与调控作用??生物不是孤立存在的，相反，大多数生物通过相互联系的生态系统进行交流。近年??来，跨物种交流的研究受到了广泛的关注。这一概念被定义为不同物种的动物、植物、??真菌和细菌之间通过一系列激素或激素类化学物质的交流。随后，随着细菌信号调节哺??乳动物和植物细胞信号转导以及宿主激素与群体感应分子交叉信号调节细菌基因表达的??认识，这一领域得到扩展。近年来，有报道表明，被称为ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ的小的非编码??ＲＮＡ不仅在其来源的细胞中发挥功能，还可以从一个物种传导进另一个物种，进行不??同的物种间交流和信号干扰ｔ１１９］。其中有研究表明３？末端带有２＇－０－甲基化的植物??ｍｉｃｒｏＲＮＡ可以稳定地存在于人类和草食动物的血清和组织中，其浓度类似于某些内源??性哺乳动物ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ［１２Ｃ）ｌ。在ＬａＭｏｎｔｅ研究中人类ｍｉｃｒｏＲＮＡ影响疟原虫的生物学和??生存＾１。另外病毒和宿主基因表达的调节可以通过ｍｉｃｒ〇ＲＮＡ发生，大量研宄表明病??毒可以劫持宿主细胞的ｍｉｃｒｏＲＮＡ分子机器生成自己的ｍｉｃｒｏＲＮＡｓｉ１２２－１２４］，目前的证据??表明病毒可以利用ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ操纵病毒和
?东北林业大学硕士学位论文???３实验结果??３．１测序结果??将插入的ｅＥＦｌＡｌ－３＇ＵＴＲ－ＭＵＴ?Ｒ序列（不含酶切位点）和重组载体６￡？１八１－３＇１１＾－??ＭＵＴｐＭＩＲ－ＲＥＰＯＲＴ?（ＰＭＩＲ－ｅＥＦｌＡｌ－ｌ．ＰＭｌＲ－Ｒ＿４９４７］０２．Ｂ１８０６０４＿Ｂ０）的测序序列进行??比对，比对结果图３－丨表明ｅＥＦｌＡｌ?３＇ＵＴＲ突变型重组载体构建成功。??＋?Ｘｅ３〇ｒｉｔ￥?ＩｌｉｉｌＨＩＩｌｌｌＨｌｉｌｉｆｔｌｉｌｉＨＩＨ??Ｍ＆〕ｉ?－?ｗＡＡｌ?？ＺｎｒｔＡｓ－．ｉ?ｔｉｉｉｎ??１０?２０?３０?４Ｑ?５０?６０?７０?８０??ｅＥＦｌＡｌ－Ｓ＇ＵＴＲ－ＫＵＩ?Ｒ．ｓｅｑ??０??？ＫＩＲ－ｅＥＦｌＡｌ－ｉ?．?ＰＭＩＲ－Ｒ．?４５４７１０２?．Ｂ１Ｓ０￡０４＿３０?ＴＣＳＳＡＡＣＳＩＴＧＴＡＡＡＣＳＡＣＳＳＣＣＡＳＴＧＣＣＡＡＳＣＩＡＳＣＧＳＣＣＳＣＡＴＡＣＡＡＡＡＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＣＡＧＡＩＣＣＸＡＴＳｉＡＡＡＴＡＡＡ?８０??—?？？？??ＭａＤｃｒｉｔｙ?ＡＳＡＴＣＣｍｙｉＡＡＳＣＩＴＣ＾ＴＩＣＴＳＡＡ＾ＩＴＴＩ美?ＣＳＡＴＴＩＡＴｄｌＡＡＣｐ－ＳＩＣＩＴｎＡｉｐＡＣＴＡＡＡＣＴＴ＾＾－ｄ１１＾??９Ｑ?１００?１１０?１２０?１３０?１４０?１５０?１６０??￡￡Ｆ１Ａ１－３？ＵＩＲ－ＫＵＴ?Ｒ．ｓｅｑ??ＡＳＣｎＴＣｎＣＴＳＡＡＳＧｎｉＴＡ二？ＡｍＡＩＣＡｎＡＡＣＣ＾ＳＴＣｉｍＡＣＴＡ二＾ＡＣＩＩＡＡＡＩＣ，３Ａ?￡４??ＦＭＩＥ－ｅＥＦＩＡｉ－１．?ＰＨＩＲ－Ｒ．?４９４７１０２?．Ｂ１８０￡０４＿Ｂ０?ＡＳＡＴＣＣｎＴＡＴ
【参考文献】：
期刊论文
[1]eEF1A1回复表达对敲除eEF1A1基因的Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及机制研究[J]. 黄毅,胡建达,伍严安,郑静,齐元麟,陈英玉,黄肖利. 中国实验血液学杂志. 2013(02)
硕士论文
[1]MicroRNA PC-5p-1090靶向SOX9基因[D]. 肖慧.东北林业大学 2018
[2]MicroRNA PC-5p-1090靶向MARCKS并抑制细胞增殖[D]. 吴尽.东北林业大学 2018
本文编号：3465403
【文章来源】：东北林业大学黑龙江省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：52 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２?ｍｉｃｒｏＲＮＡ的产生和加工过程［７４１??Ｆｉｇ．?１－２?Ｔｈｅ?ｂｉｏｇｅｎｅｓｉｓ?ｏｆ?ｍｉｃｒｏＲＮＡ１７４１??
?东北林业大学硕士学位论文???预测或筛选ｍｉｃｒｏ?ＲＮ?Ａ结合位点??Ｃ??＞?ｆ??ｍｉＲＮＡ／ｍＲＮＡ互作关系??．??外源ｍｉＲＮＡ和?ｍｉＲＮＡ对耙标?ｍｉＲＮＡ对细胞??ｍＲＮＡ共转?蛋白的影响?功能的影响??图１－４?ｍｉｃｒｏＲＮＡ功能验证流程图??Ｆｉｇ?１－４?Ｐｒｏｐｏｓｅｄ?ｆｌｏｗ?ｄｉａｇｒａｍ?ｆｏｒ?ｍｉｃｒｏＲＮＡ?ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ??１．６?ＭｉｃｒｏＲＮＡ的异源表达与调控作用??生物不是孤立存在的，相反，大多数生物通过相互联系的生态系统进行交流。近年??来，跨物种交流的研究受到了广泛的关注。这一概念被定义为不同物种的动物、植物、??真菌和细菌之间通过一系列激素或激素类化学物质的交流。随后，随着细菌信号调节哺??乳动物和植物细胞信号转导以及宿主激素与群体感应分子交叉信号调节细菌基因表达的??认识，这一领域得到扩展。近年来，有报道表明，被称为ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ的小的非编码??ＲＮＡ不仅在其来源的细胞中发挥功能，还可以从一个物种传导进另一个物种，进行不??同的物种间交流和信号干扰ｔ１１９］。其中有研究表明３？末端带有２＇－０－甲基化的植物??ｍｉｃｒｏＲＮＡ可以稳定地存在于人类和草食动物的血清和组织中，其浓度类似于某些内源??性哺乳动物ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ［１２Ｃ）ｌ。在ＬａＭｏｎｔｅ研究中人类ｍｉｃｒｏＲＮＡ影响疟原虫的生物学和??生存＾１。另外病毒和宿主基因表达的调节可以通过ｍｉｃｒ〇ＲＮＡ发生，大量研宄表明病??毒可以劫持宿主细胞的ｍｉｃｒｏＲＮＡ分子机器生成自己的ｍｉｃｒｏＲＮＡｓｉ１２２－１２４］，目前的证据??表明病毒可以利用ｍｉｃｒｏＲＮＡｓ操纵病毒和
?东北林业大学硕士学位论文???３实验结果??３．１测序结果??将插入的ｅＥＦｌＡｌ－３＇ＵＴＲ－ＭＵＴ?Ｒ序列（不含酶切位点）和重组载体６￡？１八１－３＇１１＾－??ＭＵＴｐＭＩＲ－ＲＥＰＯＲＴ?（ＰＭＩＲ－ｅＥＦｌＡｌ－ｌ．ＰＭｌＲ－Ｒ＿４９４７］０２．Ｂ１８０６０４＿Ｂ０）的测序序列进行??比对，比对结果图３－丨表明ｅＥＦｌＡｌ?３＇ＵＴＲ突变型重组载体构建成功。??＋?Ｘｅ３〇ｒｉｔ￥?ＩｌｉｉｌＨＩＩｌｌｌＨｌｉｌｉｆｔｌｉｌｉＨＩＨ??Ｍ＆〕ｉ?－?ｗＡＡｌ?？ＺｎｒｔＡｓ－．ｉ?ｔｉｉｉｎ??１０?２０?３０?４Ｑ?５０?６０?７０?８０??ｅＥＦｌＡｌ－Ｓ＇ＵＴＲ－ＫＵＩ?Ｒ．ｓｅｑ??０??？ＫＩＲ－ｅＥＦｌＡｌ－ｉ?．?ＰＭＩＲ－Ｒ．?４５４７１０２?．Ｂ１Ｓ０￡０４＿３０?ＴＣＳＳＡＡＣＳＩＴＧＴＡＡＡＣＳＡＣＳＳＣＣＡＳＴＧＣＣＡＡＳＣＩＡＳＣＧＳＣＣＳＣＡＴＡＣＡＡＡＡＡＡＣＣＡＡＣＡＣＡＣＡＧＡＩＣＣＸＡＴＳｉＡＡＡＴＡＡＡ?８０??—?？？？??ＭａＤｃｒｉｔｙ?ＡＳＡＴＣＣｍｙｉＡＡＳＣＩＴＣ＾ＴＩＣＴＳＡＡ＾ＩＴＴＩ美?ＣＳＡＴＴＩＡＴｄｌＡＡＣｐ－ＳＩＣＩＴｎＡｉｐＡＣＴＡＡＡＣＴＴ＾＾－ｄ１１＾??９Ｑ?１００?１１０?１２０?１３０?１４０?１５０?１６０??￡￡Ｆ１Ａ１－３？ＵＩＲ－ＫＵＴ?Ｒ．ｓｅｑ??ＡＳＣｎＴＣｎＣＴＳＡＡＳＧｎｉＴＡ二？ＡｍＡＩＣＡｎＡＡＣＣ＾ＳＴＣｉｍＡＣＴＡ二＾ＡＣＩＩＡＡＡＩＣ，３Ａ?￡４??ＦＭＩＥ－ｅＥＦＩＡｉ－１．?ＰＨＩＲ－Ｒ．?４９４７１０２?．Ｂ１８０￡０４＿Ｂ０?ＡＳＡＴＣＣｎＴＡＴ
【参考文献】：
期刊论文
[1]eEF1A1回复表达对敲除eEF1A1基因的Jurkat细胞增殖、凋亡的影响及机制研究[J]. 黄毅,胡建达,伍严安,郑静,齐元麟,陈英玉,黄肖利. 中国实验血液学杂志. 2013(02)
硕士论文
[1]MicroRNA PC-5p-1090靶向SOX9基因[D]. 肖慧.东北林业大学 2018
[2]MicroRNA PC-5p-1090靶向MARCKS并抑制细胞增殖[D]. 吴尽.东北林业大学 2018
本文编号：3465403
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3465403.html
