旋毛虫成虫排泄分泌物对中性粒细胞主要功能的影响研究

发布时间：2021-10-29 22:15

　　中性粒细胞（Polymorphonuclear,PMN）作为机体抵抗外来病原体最重要的天然免疫成员,除了传统的吞噬和脱颗粒的作用方式外,还能够释放由DNA、组蛋白H3、髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）和弹性蛋白酶（elastase）等组成的网状结构,即中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps,NETs）,NETs在机体内发挥捕获并消灭病原体的作用。而目前关于旋毛虫逃避中性粒细胞捕获及杀灭作用的机制还没有系统的报道。旋毛虫病是一种由旋毛虫（Trichinella spiralis）感染引起的严重危害人类健康的人兽共患寄生虫病。目前的研究已证实,旋毛虫排泄分泌物（Excretion/Secretion,ES）具有核酸酶（DNase）活性,可降解胞外诱捕网以逃避捕获。而本实验是在加入核酸酶抑制剂（Aurintricarboxylic acid,ATA）阻断DNase活性的条件下,探究旋毛虫成虫ES对中性粒细胞胞外诱捕网形成、活性氧物质（ROS）生成和细胞因子产生的影响。首先,提取小鼠骨髓中性粒细胞（Murine bone mar... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：78 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
英文缩写表
前言
第一篇 文献综述
    第一章 中性粒细胞功能的研究进展
        1 中性粒细胞的免疫应答
            1.1 趋化作用
            1.2 吞噬调理
            1.3 中性粒细胞胞浆内颗粒的双重作用
        2 中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)
            2.1 NETs的形成机制
            2.2 NETs与寄生虫
        3 病原体逃避中性粒细胞的免疫应答
            3.1 抑制吞噬杀伤
            3.2 NETs
            3.3 凋亡
        4 小结
    第二章 寄生虫排泄分泌物的研究进展
        1 排泄分泌物的来源
        2 排泄分泌物的功能
            2.1 参与免疫逃避
            2.2 免疫调节作用
        3 排泄分泌物的应用
            3.1 诊断
            3.2 疫苗研发
            3.3 治疗免疫性疾病
        4 小结
第二篇 研究内容
    第一章 中性粒细胞的分离与鉴定
        1 实验材料
            1.1 主要仪器
            1.2 主要试剂与耗材
            1.3 主要实验动物与细胞
            1.4 主要试剂的配制
        2 实验方法
            2.1 小鼠骨髓中性粒细胞的分离
            2.2 中性粒细胞纯度检测
            2.3 NETs免疫荧光检测
            2.4 中性粒细胞胞外DNA定量分析
        3 实验结果
            3.1 小鼠骨髓中性粒细胞的分离
            3.2 PMA诱导NETs形成
            3.3 确定PMA诱导NETs形成的最佳时间和浓度
        4 讨论
        5 小结
    第二章 旋毛虫成虫排泄分泌物抑制NETS释放
        1 实验材料
            1.1 主要仪器
            1.2 主要试剂
            1.3 实验动物、细胞和虫株
            1.4 主要试剂的配置
        2 实验方法
            2.1 旋毛虫肌幼虫(ML)的收集
            2.2 旋毛虫成虫(Ad3)的收集
            2.3 Ad3 ES的收集
            2.4 Ad3 ES SDS-PAGE分析
            2.5 cck-8法检测Ad3 ES对PMN的毒性
            2.6 不同浓度的Ad3 ES抑制PMA诱导NETs的释放
            2.7 LDH检测
            2.8 ROS检测
        3 实验结果
            3.1 Ad3 ES抗原SDS-PAGE的测定结果
            3.2 CCK-8检测Ad3 ES对PMN的毒性
            3.3 Ad3 ES抑制NETs的形成
            3.4 LDH检测
            3.5 ROS检测
        4 讨论
        5 小结
    第三章 AD3 ES对中性粒细胞吞噬功能及分泌细胞因子的影响
        1 实验材料
            1.1 主要仪器
            1.2 主要试剂
            1.3 主要质粒、菌株
            1.4 实验动物、细胞
            1.5 主要试剂的配制
        2 实验方法
            2.1 构建及鉴定增强型绿色荧光蛋白(eGFP)标记的大肠杆AAAa菌
            2.2 PMN吞噬效率的测定
            2.3 qRT-PCR
            2.4 ELISA法检测Ad3 ES对PMN释放细胞因子的影响
        3 实验结果
            3.1 重组质粒的酶切鉴定
            3.2 荧光显微镜观察增强型绿色荧光标记的大肠杆菌
            3.3 ES对 PMN吞噬能力的影响
            3.4 qRT-PCR检测Ad3 ES对中性粒细胞细胞因子表达的影响
            3.5 ELISA检测旋毛虫ES对中性粒细胞细胞因子表达的影响
        4 讨论
        5 小结
结论
参考文献
导师简介
作者简介
在学期间成果
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]浅析寄生虫的免疫逃避[J]. 方金亮.  中国畜禽种业. 2015(11)
[2]细胞因子白介素-6和白介素-10对中性粒细胞凋亡的影响[J]. 张银中,叶铁虎,赵丽云,任洪智,黄宇光.  武警医学. 2004(09)

博士论文
[1]旋毛虫不同发育期抗原基因克隆及其对猪的保护作用研究[D]. 徐静.吉林大学 2017



本文编号：3465479