褪黑激素对内蒙古绒山羊皮肤毛囊中RORα、FGF21基因表达的影响
发布时间:2021-11-19 21:48
褪黑激素主要由松果体产生,是一种神经内分泌信号,对绒山羊进行褪黑激素处理,可诱导绒山羊绒毛生长,提高产绒量。本研究基于课题组前期获得的内蒙古绒山羊皮肤组织埋植褪黑激素组与对照组8月、9月、12月、2月的转录组数据,选取表达差异显著的RORα、FGF21作为候选基因,通过荧光定量PCR技术和Western blot技术,分析RORα、FGF21基因在内蒙古绒山羊皮肤组织中mRNA水平和蛋白水平上的表达,为进一步探索褪黑激素促进绒毛生长机理提供理论依据,主要研究结果如下:1.选取内蒙古绒山羊母羊12只,随机分成两组,每组6只,一组埋植褪黑激素,作为实验组,另外一组作为对照组。连续采集12个月绒山羊肩胛骨体侧皮肤组织,利用实时荧光定量PCR检测RORα、FGF21基因的表达情况,结果表明:RORα基因除4月和8月份外,其他月份实验组均与对照组有显著性差异(P<0.05),其中实验组11月、1月、2月极显著高于对照组(P<0.01)。实验组FGF21基因在11月、1月、2月份表达量显著高于对照组(P<0.05),在7月份表达量显著低于对照组(P<0.05)。2.从采集的皮肤组织样品中选取8月、...
【文章来源】:内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】:49 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
图1实验研究的技术路线??Fig.?1?Technical?route?of?experimental?studies??
14?褪黑激素对内蒙古滅山羊皮肤毛囊中RORcu?FGF21基因表达的影响??表3?RT-qPCR反应体系??Table.3?rt-qpcr?Response?System??成分?用量(ul)???SYBRPremixExTaqTM?II?10.0??RoxreferenceDye?II?0.4??ForwardPrimer?0.8??ReversePrimer?0.8??RNase-freeddH2〇?6??cDNA?2.0??TotalVolume?20??反应体系:预变性阶段为95°C30s,变性阶段为95°C5s,退火温度参??照表2,时间为30s,共40个循环。用1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测荧光定??量PCR产物。??3.2.6数据分析??采用2_AAet法对所得数据进行相对定量分析,以少为内参基因,??利用spss软件进行不同组不同月份显著性检验。??3.2.7结果与分析??3.2.7.1总RNA琼脂糖凝胶电泳检测结果??用1%的琼脂糖凝胶电泳检测所提取RNA样品的条带,发现5S、18S??和28S条带清晰、完整性良好,可进行后续实验。??—s??图2?皮肤总RNA琼脂糖凝胶电泳检测结果??Fig.2?Electrophoretogram?of?skin?total?RNA??
22?褪黑激素对内蒙古絨山羊皮肤毛囊中RORcu?FGF21基因表达的影响??环境下孵育过夜。抗体稀释浓度:为1:?5000,FGF2/为1:1000,??尺?为?1:100。??(6)洗脱??TBST充分洗涤PVDF膜5-6次,5min/次。??(7)二抗孵育??将PVDF膜浸泡于已经稀释好的二抗中,37°C摇床孵育2h,二抗的稀??释浓度按1:50000稀释??(8)洗脱??TBST充分洗涤PVDF膜5次,5min/次。??(9)扫膜??用扫描仪中的ImageStudioVer2.1软件扫描分析胶片。??(10)统计分析方法??应用spss统计软件采用单因素方差分析的方式分析皮肤蛋白中的??RORa、FGF21蛋白。相对表达量=目的蛋白的灰度值/内参的灰度值。??4.3?结果与分析??4.3.1?标准曲线??从图中可看出此为皮肤样品蛋白浓度的标准曲线,其回归方程和相关??系数分别为y=0.5645x+0.035,R2=0.9966,说明测得的浓度可靠性高,可??进行后续实验。??0.7-|??0.6-?>??0.5-??°*3'?y?=?0.?5645x?+?0.?035??皮=0.?9966??。2?^??0.1?-??Q?-j?]?|?|?I?I?I??0?0.?2?0.4?0.6?0.8?1?1.2??图8?蛋白标准品的标准曲线??Fig.8?Standard?curve?of?protein?standard??
【参考文献】:
期刊论文
[1]RORα激动剂SR1078抑制人胃癌MGC803细胞增殖与迁移侵袭的作用[J]. 裴大兵,张翼臻,苏坚,刘芳,夏红,苏琦. 肿瘤学杂志. 2020(08)
[2]外源褪黑激素对罕山白绒山羊绒毛生长相关基因表达差异的影响[J]. 丽春,李金泉,张文广,王思珍,王国富,高树新,付绍印. 畜牧与饲料科学. 2019(09)
[3]母体埋植褪黑激素对子一代獭兔内脏组织中RORα基因表达的影响[J]. 康景,封洋. 中国畜牧杂志. 2020(01)
[4]褪黑激素对内蒙古绒山羊皮肤中let-7家族及其靶基因的影响[J]. 王建蒙,付绍印,丽春,白雪,刘斌,季小阳,刘永斌,张文广. 畜牧兽医学报. 2019(07)
[5]内蒙古绒山羊钙铁锌蛋白在毛发生长过程中的表达模式分析[J]. 孙永伟,郝斐,刘东军,祁智. 内蒙古大学学报(自然科学版). 2019(04)
[6]褪黑激素对长毛兔产毛性能及兔毛品质的影响[J]. 黄冬维,丁海生,赵辉玲,程广龙,王小飞,杨永新,赵小伟,齐云霞. 中国草食动物科学. 2019(02)
[7]FGF21及其受体FGFR1和FGFR2在小鼠毛囊第1生长周期的表达[J]. 吴晋强,曹校瑞,闫瑞琴,陆娜,张娇娇,吴佳豪,赫晓燕. 畜牧兽医学报. 2019(03)
[8]绒山羊非长绒期埋植褪黑激素对其产绒性能和血浆褪黑激素浓度的影响[J]. 刘影,张欢,段涛,武子元,李炎,张微. 中国农业大学学报. 2019(03)
[9]陇东优质高产绒山羊选育及其生产性能测定[J]. 周步峰,冯玲霞. 畜牧兽医杂志. 2019(02)
[10]MT和FGF5调控辽宁绒山羊绒毛生长相关LncRNA的筛选及鉴定[J]. 金梅,张丽娟,曹倩,郭鑫英. 中国农业科学. 2019(04)
博士论文
[1]绒山羊光控增绒的效果评价和机制研究[D]. 杨敏.中国农业科学院 2017
[2]褪黑激素调控山羊绒生长的模式及机理初探[D]. 段春辉.中国农业大学 2016
[3]褪黑激素影响山羊绒生长的分子机理[D]. 丽春.内蒙古农业大学 2012
[4]持续埋植褪黑素对绒山羊绒毛生长特性和相关基因影响的研究[D]. 常子丽.内蒙古农业大学 2010
[5]褪黑激素受体基因在内蒙古绒山羊皮肤毛囊中的表达[D]. 赵艳红.内蒙古农业大学 2009
硕士论文
[1]半胱氨酸、蛋氨酸和褪黑激素对内蒙古绒山羊成纤维细胞增殖调控作用的研究[D]. 李萌萌.内蒙古农业大学 2019
[2]维甲酸相关孤核受体α(RORα)在奥曲肽抗大鼠肝纤维化的作用[D]. 龚义飞.安徽医科大学 2018
[3]FGF21及其受体FGFR1、2在小鼠毛囊形成和发育中的定位和表达研究[D]. 曹校瑞.山西农业大学 2018
[4]Fgf21基因敲除小鼠背部皮肤组织miRNA的差异表达分析及其靶基因预测[D]. 刘旭.内蒙古大学 2018
[5]基于RNA-seq分析褪黑素对内蒙古绒山羊毛囊发育相关基因表达的影响[D]. 王岩.内蒙古农业大学 2017
[6]辽宁绒山羊绒毛生长、血液中相关激素变化及皮肤中基因的表达分析[D]. 王昊.沈阳农业大学 2016
[7]利用RNA干扰技术研究RORα对褪黑激素促进绒毛生长相关基因表达的影响[D]. 张铁佳.内蒙古农业大学 2016
[8]褪黑激素对内蒙古绒山羊产绒性能及皮肤毛囊中RORa表达的影响[D]. 吴静.内蒙古农业大学 2016
[9]利用CRISPR-Cas9技术构建FGF21基因敲除小鼠及其对毛发生长的作用研究[D]. 张平.内蒙古大学 2016
[10]辽宁绒山羊次级毛囊年周期变化规律及其相关生物钟基因研究[D]. 舒国涛.中国农业科学院 2014
本文编号:3505933
【文章来源】:内蒙古农业大学内蒙古自治区
【文章页数】:49 页
【学位级别】:硕士
【部分图文】:
图1实验研究的技术路线??Fig.?1?Technical?route?of?experimental?studies??
14?褪黑激素对内蒙古滅山羊皮肤毛囊中RORcu?FGF21基因表达的影响??表3?RT-qPCR反应体系??Table.3?rt-qpcr?Response?System??成分?用量(ul)???SYBRPremixExTaqTM?II?10.0??RoxreferenceDye?II?0.4??ForwardPrimer?0.8??ReversePrimer?0.8??RNase-freeddH2〇?6??cDNA?2.0??TotalVolume?20??反应体系:预变性阶段为95°C30s,变性阶段为95°C5s,退火温度参??照表2,时间为30s,共40个循环。用1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测荧光定??量PCR产物。??3.2.6数据分析??采用2_AAet法对所得数据进行相对定量分析,以少为内参基因,??利用spss软件进行不同组不同月份显著性检验。??3.2.7结果与分析??3.2.7.1总RNA琼脂糖凝胶电泳检测结果??用1%的琼脂糖凝胶电泳检测所提取RNA样品的条带,发现5S、18S??和28S条带清晰、完整性良好,可进行后续实验。??—s??图2?皮肤总RNA琼脂糖凝胶电泳检测结果??Fig.2?Electrophoretogram?of?skin?total?RNA??
22?褪黑激素对内蒙古絨山羊皮肤毛囊中RORcu?FGF21基因表达的影响??环境下孵育过夜。抗体稀释浓度:为1:?5000,FGF2/为1:1000,??尺?为?1:100。??(6)洗脱??TBST充分洗涤PVDF膜5-6次,5min/次。??(7)二抗孵育??将PVDF膜浸泡于已经稀释好的二抗中,37°C摇床孵育2h,二抗的稀??释浓度按1:50000稀释??(8)洗脱??TBST充分洗涤PVDF膜5次,5min/次。??(9)扫膜??用扫描仪中的ImageStudioVer2.1软件扫描分析胶片。??(10)统计分析方法??应用spss统计软件采用单因素方差分析的方式分析皮肤蛋白中的??RORa、FGF21蛋白。相对表达量=目的蛋白的灰度值/内参的灰度值。??4.3?结果与分析??4.3.1?标准曲线??从图中可看出此为皮肤样品蛋白浓度的标准曲线,其回归方程和相关??系数分别为y=0.5645x+0.035,R2=0.9966,说明测得的浓度可靠性高,可??进行后续实验。??0.7-|??0.6-?>??0.5-??°*3'?y?=?0.?5645x?+?0.?035??皮=0.?9966??。2?^??0.1?-??Q?-j?]?|?|?I?I?I??0?0.?2?0.4?0.6?0.8?1?1.2??图8?蛋白标准品的标准曲线??Fig.8?Standard?curve?of?protein?standard??
【参考文献】:
期刊论文
[1]RORα激动剂SR1078抑制人胃癌MGC803细胞增殖与迁移侵袭的作用[J]. 裴大兵,张翼臻,苏坚,刘芳,夏红,苏琦. 肿瘤学杂志. 2020(08)
[2]外源褪黑激素对罕山白绒山羊绒毛生长相关基因表达差异的影响[J]. 丽春,李金泉,张文广,王思珍,王国富,高树新,付绍印. 畜牧与饲料科学. 2019(09)
[3]母体埋植褪黑激素对子一代獭兔内脏组织中RORα基因表达的影响[J]. 康景,封洋. 中国畜牧杂志. 2020(01)
[4]褪黑激素对内蒙古绒山羊皮肤中let-7家族及其靶基因的影响[J]. 王建蒙,付绍印,丽春,白雪,刘斌,季小阳,刘永斌,张文广. 畜牧兽医学报. 2019(07)
[5]内蒙古绒山羊钙铁锌蛋白在毛发生长过程中的表达模式分析[J]. 孙永伟,郝斐,刘东军,祁智. 内蒙古大学学报(自然科学版). 2019(04)
[6]褪黑激素对长毛兔产毛性能及兔毛品质的影响[J]. 黄冬维,丁海生,赵辉玲,程广龙,王小飞,杨永新,赵小伟,齐云霞. 中国草食动物科学. 2019(02)
[7]FGF21及其受体FGFR1和FGFR2在小鼠毛囊第1生长周期的表达[J]. 吴晋强,曹校瑞,闫瑞琴,陆娜,张娇娇,吴佳豪,赫晓燕. 畜牧兽医学报. 2019(03)
[8]绒山羊非长绒期埋植褪黑激素对其产绒性能和血浆褪黑激素浓度的影响[J]. 刘影,张欢,段涛,武子元,李炎,张微. 中国农业大学学报. 2019(03)
[9]陇东优质高产绒山羊选育及其生产性能测定[J]. 周步峰,冯玲霞. 畜牧兽医杂志. 2019(02)
[10]MT和FGF5调控辽宁绒山羊绒毛生长相关LncRNA的筛选及鉴定[J]. 金梅,张丽娟,曹倩,郭鑫英. 中国农业科学. 2019(04)
博士论文
[1]绒山羊光控增绒的效果评价和机制研究[D]. 杨敏.中国农业科学院 2017
[2]褪黑激素调控山羊绒生长的模式及机理初探[D]. 段春辉.中国农业大学 2016
[3]褪黑激素影响山羊绒生长的分子机理[D]. 丽春.内蒙古农业大学 2012
[4]持续埋植褪黑素对绒山羊绒毛生长特性和相关基因影响的研究[D]. 常子丽.内蒙古农业大学 2010
[5]褪黑激素受体基因在内蒙古绒山羊皮肤毛囊中的表达[D]. 赵艳红.内蒙古农业大学 2009
硕士论文
[1]半胱氨酸、蛋氨酸和褪黑激素对内蒙古绒山羊成纤维细胞增殖调控作用的研究[D]. 李萌萌.内蒙古农业大学 2019
[2]维甲酸相关孤核受体α(RORα)在奥曲肽抗大鼠肝纤维化的作用[D]. 龚义飞.安徽医科大学 2018
[3]FGF21及其受体FGFR1、2在小鼠毛囊形成和发育中的定位和表达研究[D]. 曹校瑞.山西农业大学 2018
[4]Fgf21基因敲除小鼠背部皮肤组织miRNA的差异表达分析及其靶基因预测[D]. 刘旭.内蒙古大学 2018
[5]基于RNA-seq分析褪黑素对内蒙古绒山羊毛囊发育相关基因表达的影响[D]. 王岩.内蒙古农业大学 2017
[6]辽宁绒山羊绒毛生长、血液中相关激素变化及皮肤中基因的表达分析[D]. 王昊.沈阳农业大学 2016
[7]利用RNA干扰技术研究RORα对褪黑激素促进绒毛生长相关基因表达的影响[D]. 张铁佳.内蒙古农业大学 2016
[8]褪黑激素对内蒙古绒山羊产绒性能及皮肤毛囊中RORa表达的影响[D]. 吴静.内蒙古农业大学 2016
[9]利用CRISPR-Cas9技术构建FGF21基因敲除小鼠及其对毛发生长的作用研究[D]. 张平.内蒙古大学 2016
[10]辽宁绒山羊次级毛囊年周期变化规律及其相关生物钟基因研究[D]. 舒国涛.中国农业科学院 2014
本文编号:3505933
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