维生素D 3 通过自噬和内质网应激途径调控猪肠道轮状病毒感染研究

发布时间：2021-11-19 21:50

　　轮状病毒是仔猪病原性腹泻的主要致病因子之一,主要感染仔猪小肠成熟上皮细胞,其流行率可达80%,目前无特效药治疗。前人研究结果表明维生素D3对轮状病毒感染发挥一定抗病毒作用。本研究旨在考察维生素D3是否通过调节自噬和内质网应激路径对轮状病毒感染发挥作用。试验一采用2×2因子试验设计,两个主效应分别为轮状病毒应激条件（灌服病毒和不灌服病毒）和日粮VD3添加水平（200IU和5000 IU）,24头DLY生长猪（平均体重26.2±2.02 kg）猪经7d试验后采集空肠和回肠样品,测定自噬和内质网应激路径相关基因表达量。试验二以OUS株轮状病毒感染IPEC-J2细胞为模型,在筛选病毒接毒毒力和VD3添加水平的基础上,研究自噬和内质网应激路径在VD3影响轮状病毒感染过程中发挥的作用。试验结果表明：（1）猪体内试验发现,灌服轮状病毒提高肠道GRP78、XBP1、IRE1、ATF6和CHOP的相对表达量（P<0.05）,饲粮添加高剂量VD3能够在一定程度上抑制上述基因的表达上调；与对照组比较,轮状病毒提高自噬标志基因Beclinl的表达,添加高剂量VD3显著提高LC3-Ⅱ/Ⅰ和PR-39的相对... 

【文章来源】：四川农业大学四川省 211工程院校

【文章页数】：73 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
前言
第一章 文献综述
    1 维生素D_3研究进展
        1.1 维生素D_3的吸收与代谢
        1.2 维生素D_3免疫调节作用机理
            1.2.1 维生素D_3在肠道免疫方面的作用
            1.2.2 维生素D_3抗病原微生物感染的作用
            1.2.3 维生素D_3与自噬
    2 轮状病毒
        2.1 轮状病毒病原特点
        2.2 轮状病毒传播特点
        2.3 轮状病毒临床症状
        2.4 轮状病毒引起腹泻的可能发病机理
        2.5 轮状病毒与内质网应激
第二章 有待研究的问题及本研究的目的、意义和技术路线
    1 有待研究的问题
    2 研究目的
    3 研究意义
    4 技术路线
第三章 试验研究
    试验一 维生素D_3对感染轮状病毒猪肠道自噬和内质网应激通路基因表达的影响
        1. 材料与方法
            1.1 轮状病毒
            1.2 试验设计及试验动物
            1.3 试验日粮
            1.4 饲养管理
            1.5 样品采集
            1.6 考察指标及测定方法
            1.7 数据统计分析
        2 结果与分析
            2.1 肠道内质网应激路径相关基因相对表达量
            2.2 肠道自噬通路相关基因相对表达量
        3 讨论
        4 小结
    试验二 维生素D_3通过自噬或内质网应激路径缓解轮状病毒对IPEC-J2细胞的感染作用
        1 材料与方法
            1.1 试验材料
            1.2 主要试验试剂及仪器
            1.3 试验方法
                1.3.1 IPEC-J2细胞复苏
                1.3.2 IPEC-J2细胞系常规培养
                1.3.3 OUS株轮状病毒的培养
        2 试验内容
            2.1 试验1 轮状病毒感染剂量的筛选
                2.1.1 试验目的
                2.1.2 试验设计
                2.1.3 细胞处理
                2.1.4 考察指标及测定方法
                2.1.5 数据处理与统计分析
                2.1.6 结果与分析
                2.1.7 讨论
                2.1.8 小结
            2.2 试验2 细胞轮状病毒感染条件下适宜维生素D_3添加浓度筛选
                2.2.1 试验目的
                2.2.2 试验设计
                2.2.3 细胞处理
                2.2.4 样品收集
                2.2.5 考察指标及测定方法
                2.2.6 数据处理及统计分析
                2.2.7 结果与分析
                2.2.8 讨论
                2.2.9 小结
            2.3 试验3 VD_3对感染轮状病毒IPEC-J2细胞ERS路径的影响
                2.3.1 试验目的
                2.3.2 试验设计
                2.3.3 细胞处理
                2.3.4 样品收集
                2.3.5 考察指标及测定方法
                2.3.6 数据处理及统计分析
                2.3.7 结果与分析
                2.3.8 讨论
                2.3.9 小结
            2.4 试验4 VD_3对感染轮状病毒IPEC-J2细胞自噬路径的影响
                2.4.1 试验目的
                2.4.2 试验设计
                2.4.3 细胞处理
                2.4.4 样品收集
                2.4.5 考察指标及测定方法
                2.4.6 数据处理与统计分析
                2.4.7 结果与分析
                2.4.8 讨论
                2.4.9 小结
全文总体讨论、结论及有待进一步研究的问题
    1 总体讨论
    2 全文结论
    3 有待进一步研究的问题
附录
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
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硕士论文
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[2]PRRSV感染诱导内质网应激反应的分子机制研究[D]. 刘苏燕.华中农业大学 2010
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[4]止泻方治疗小儿轮状病毒肠炎的临床研究[D]. 樊蔚.山东中医药大学 2009



本文编号：3505937