新城疫病毒降解线粒体抗病毒信号蛋白MAVS的机制研究

发布时间：2021-12-12 10:24

　　新城疫（Newcastle Disease, ND）由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus, NDV）引1起,可致多种禽类死亡,给我国及世界养禽业造成了巨大的损失。NDV为副黏病毒科,禽腮腺炎病毒属,单股负链RNA病毒,并且具有囊膜。其基因组结构为3’-NP-P-M-F-HN-L-5’,分别对应编码六种病毒结构蛋白。病毒感染细胞后各种各样的免疫信号通路被激活,并产生抗病毒免疫反应和炎性反应来对抗病毒感染。模式识别受体（PRRs）中的RIG-Ⅰ样受体（RLR）是细胞质中一类RNA解旋酶,它们可以通过其对NA配体结合病原相关分子模式（PAMP）,识别非自身的病毒RNA。被感染的细胞中,这种相互作用可以通过触发RLRs及包括MAVS在内的其下游信号分子的活化,最终导致一型干扰素（IFN）的产生和炎性因子的产生,细胞做出抗病毒免疫应答.然而,很多病毒通过保护自身RNA不被识别,或靶向RLR信号通路中的信号分子等作用,以逃避细胞的先天性免疫应答。本研究通过检测NDV对MAVS的影响,来研究NDV对RLR信号通路的免疫逃避机制。一、NDV感染细胞诱导MAVS降解本研究分别使用... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：65 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
符号说明
第一章 文献综述及背景
    1 NDV研究背景简介
    2 RIG-I样受体信号通路及其调控研究进展
        2.1 RLRs介导的抗病毒信号通路
        2.2 RLRs介导的信号转导反应
        2.3 RLR通路的泛素化
        2.4 病毒干扰RLRs介导的信号转导反应
        2.5 NLRs对RLR信号通路的影响
        2.6 总结
第二章 NDV感染细胞诱导MAVS的降解
    1 材料和方法
        1.1 毒株和细胞系
        1.2 试剂和仪器
        1.3 Herts/33、ZJ1、La Sota感染HeLa或A549细胞
        1.4 UV灭活NDV
        1.5 样品的Western Blot分析
        1.6 细胞总RNA的提取(Trizol法)及Real-time PCR
    2 结果和分析
        2.1 Herts/33感染HeLa和A549细胞
        2.2 ZJ1和La Sota感染HeLa细胞
        2.3 UV灭活的Herts/33不能诱导MAVS的降解和IFN-β的产生
    3 讨论
第三章 NDV通过PCBP2非依赖途径诱导MAVS降解
    1 材料和方法
        1.1 毒株和细胞系
        1.2 载体及分子生物学相关试剂
        1.3 试剂和仪器
        1.4 Herts/33、ZJ1、La Sota、GFP-NDV感染HeLa或A549细胞
        1.5 细胞内PCBP2的干扰
        1.6 HA-PCBP2真核表达载体的构建
        1.7 质粒转染HeLa细胞
    2 结果与分析
        2.1 Herts/33感染HeLa和A549细胞
        2.2 ZJ1和La Sota感染HeLa细胞
        2.3 PCBP2干扰条件的摸索
        2.4 敲低PCBP2之后对细胞内病毒复制的影响
        2.5 HA-PCBP2真核表达质粒的构建
        2.6 转染PCBP2对MAVS的影响
    3 讨论
第四章 NDV通过蛋白酶体途径诱导MAVS的降解
    1 材料与方法
        1.1 细胞与毒株
        1.2 泛素-蛋白酶体系统抑制剂
        1.3 试剂和仪器
        1.4 泛素-蛋白酶体系统抑制剂处理细胞
        1.5 TCID50(病毒感染力)的测定
        1.6 细胞总RNA的提取(Trizol法)及Real-time PCR
    2 结果与分析
        2.1 泛素-蛋白酶体抑制剂的选择
        2.2 MG132处理后对病毒滴度的影响
    3 讨论
第五章 NDV病毒蛋白对MAVS降解的检测
    1 材料与方法
        1.1 质粒和细胞
        1.2 载体及分子生物学相关试剂
        1.3 ZJ1 HA-P/W、Flag-V真核表达质粒的构建
        1.4 质粒转染HeLa细胞
    2 结果与分析
        2.1 HA-P/W、Flag-V真核表达质粒的构建
        2.2 转染Flag-P/M/NP、HA-P/W后MAVS表达水平的变化
        2.3 转染Flag-ZJ V后MAVS表达水平的变化
    3 讨论
全文总结
参考文献
附录
致谢
攻读学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]病毒感染引发天然免疫细胞信号转导研究进展[J]. 孙文香,蒋争凡.  中国细胞生物学学报. 2013(05)
[2]蛋白酶体及其抑制剂的研究进展[J]. 李明,缪泽鸿,丁健.  中国药理学通报. 2008(05)



本文编号：3536504