猪源IFITM3抗乙型脑炎病毒和伪狂犬病毒的效果和机制研究

发布时间：2022-01-02 02:10

　　日本乙型脑炎是一种由乙型脑炎病毒（JEV）感染引起的虫媒性人畜共患传染病,在全世界范围尤其亚洲的大部分地区传播。猪是乙型脑炎病毒传播和增殖过程中重要的储存宿主和传染源。乙型脑炎对于猪群的危害非常严重,可造成怀孕母猪的流产死产和猪群的繁殖障碍。伪狂犬病是一类由伪狂犬病病毒（PRV）引起多种动物发病的急性动物疫病,主要引起动物的神经症状、呼吸道症状和母猪的流产、死产以及不育等,对养猪业造成巨大的经济损失。近年来随着转基因等生物技术的快速发展,动物的分子抗病育种得到长足的进步,可以从源头上控制疫病尤其是病毒性疾病的发生。分子抗病育种的关键是广谱、高效的抗病基因发掘、功能验证和分子机制的研究。近年来已有多篇文献指出人和鼠源的IFITM蛋白对于多种有囊膜的RNA病毒均具有很好的抑制病毒增殖的效果。鉴于此,本研究开展了猪源IFITM3对有囊膜RNA病毒JEV和DNA病毒PRV的抑制效果和相关机制的探讨,主要包括以下内容：1. sIFITM3对JEV的抗病毒效应以及机制研究使用100PFU和50PFU的JEV（SA14-14-2株、P3株和SX09S-01株）同时感染sIFITM3过表达细胞BHK-... 

【文章来源】：华中农业大学湖北省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：67 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表(Abbreviation)
1 文献综述
    1.1 日本乙型脑炎简介
    1.2 伪狂犬病简介
    1.3 IFITM蛋白介绍
    1.4 IFITM3的抗病毒研究进展
        1.4.1 IFITM3抑制西尼罗河病毒和登革热病毒的早期复制
        1.4.2 IFITM蛋白抑制甲型流感病毒和黄病毒在进入时的感染
        1.4.3 IFITM抑制流感病毒和黄病毒属病毒感染的可能机制
        1.4.4 IFITM3抑制VSV G蛋白介导的病毒的进入过程
    1.5 小结
2 研究目的和意义
3 材料与方法
    3.1 实验材料
        3.1.1 毒株、细胞与菌株
        3.1.2 质粒
        3.1.3 工具酶及主要试剂
        3.1.4 培养基及其配制
        3.1.5 主要缓冲液与相关试剂及其配制
        3.1.6 实验动物
    3.2 实验方法
        3.2.1 样品基因组DNA的提取
        3.2.2 样品总RNA的提取
        3.2.3 样品总RNA的RT-PCR
        3.2.4 目的基因的PCR扩增检测
        3.2.5 PCR产物的电泳检测
        3.2.6 目的基因的实时荧光定量PCR扩增检测
        3.2.7 大肠杆菌感受态细胞的制备(氯化钙法)
        3.2.8 质粒的制备
        3.2.9 蛋白免疫印迹(Western blot)检测目的蛋白的表达
        3.2.10 细胞的传代
        3.2.11 病毒的扩增
        3.2.12 病毒毒价的测定
        3.2.13 病毒的吸附与进入实验
        3.2.14 小鼠的半数致死量(MLD_(50))的测定
        3.2.15 小鼠攻毒试验
        3.2.16 实验丢弃物的无害化处理
        3.2.17 统计学方法
4 结果与分析
    4.1 细胞水平评价sIFITM3对JEV复制的影响及机制研究
        4.1.1 过表达sIFITM3对JEV增殖的影响
        4.1.2 沉默sIFITM3对JEV增殖的影响
        4.1.3 sIFITM3抑制JEV增殖的机制探讨
    4.2 细胞水平评价sIFITM3对PRV复制的影响及机制研究
        4.2.1 细胞水平过表达sIFITM3对PRV增殖的影响
        4.2.2 沉默sIFITM3对PRV增殖的影响
        4.2.3 sIFITM3抑制PRV增殖的机制探讨
    4.3 过表达sIFITM3转基因小鼠的构建以及抗JEV和PRV的初步研究
        4.3.1 过表达sIFITM3转基因小鼠构建
        4.3.2 sIFITM3对JEV在转基因小鼠模型上增殖的抑制
        4.3.3 sIFITM3对PRV在sIFITM 3转基因小鼠模型上增殖的抑制
5 讨论与结论
    5.1 讨论
        5.1.1 sIFITM3抑制JEV的增殖及其相关机制的初步研究
        5.1.2 sIFITM3抑制PRV的增殖及其相关机制的初步研究
        5.1.3 过量表达sIFITM3转基因小鼠的构建
        5.1.4 sIFITM3在机体水平上对JEV和PRV增殖的影响
    5.2 结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]乙型脑炎的流行及新型脑炎病毒[J]. 程泽华.  上海畜牧兽医通讯. 2003(06)

硕士论文
[1]猪源乙型脑炎病毒的分离鉴定及E基因假病毒的构建[D]. 曹齐树.华中农业大学 2011
[2]慢病毒载体介导转基因小鼠制备技术研究[D]. 刘勤.第三军医大学 2008



本文编号：3563263