弓形虫酰基辅酶A结合蛋白功能及其作用机制

发布时间：2022-01-02 12:40

　　龚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是重要的寄生原虫。脂类代谢对弓形虫的生长发育极为重要。已知生物细胞的长链酰基辅酶A可通过酰基辅酶A结合蛋白（acyl-CoA binding protein,ACBP）和甾醇载体蛋白（sterol carrier protein 2,SCP2）转运到不同细胞器参与脂类合成。我们通过数据库比对发现弓形虫存在两种酰基辅酶A结合蛋白,TgACBP1和TgACBP2,也具有甾醇载体蛋白TgSCP2,但未见对弓形虫ACBPs和SCP2的功能和作用机制的研究报道。首先我们证实了弓形虫体内存在ACBP1和ACBP2。通过构建内源性标记虫株,发现ACBP1分布于胞浆;胞内和胞外虫体的ACBP2的定位存在差异,分别定位于线粒体和虫体外膜。胞内虫体的ACBP2处于去磷酸化状态,胞外虫体的ACBP2处于磷酸化状态,高浓度[K+]和低浓度[Ca2+]条件下胞外虫体ACBP2发生去磷酸化;高浓度[K+]条件下胞外虫体ACBP2发生转位。胞外酶活实验显示ACBP1和ACBP2重组蛋白均能够结合NBD-C16:0-CoA,利用酵母回补实验证实TgACBP1和TgACB... 

【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图３．１－１?ＴｇＡＣＢＰ２内源性标记虫株的构建??

图３．２－３?ＴｇＡＣＢＰＩ和ＴｇＡＣＢＰ２的结构域分析??色表示酰基辅酶Ａ结合结构域，橙色表示信号肽，绿色表示锚蛋白重复序Ｆｉｇ?３．２－３?Ｄｏｍａｉｎ?ａｎａｌｙｓｉｓ?ｏｆ?ＴｇＡＣＢＰＩ?ａｎｄ?ＴｇＡＣＢＰ２??ｒｅｓｅｎｔｓ?ＡＣＢＤ，?ｏｒａｎｇｅ?ｃｏｌｏｒ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?ｓｉｇｎａｌ?ｐｅｐｔｉｄｅ，?ａｎｄ?ｇｒｅｅｎ?ｃｏｌｏｒ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?结构在线预测软件ＰＳＩＰＲＥＤ，进一步分析ＴｇＡＣＢＰ?１，发现ＡＣＢＤ结构域均含有４个ａ螺旋簇（图３．２－４）。??ＴｇＡＣＢＰＩ?Ｂ．?ＴｇＡＣＢＰ２??ＵＩＩＩｉｎｉｌｌｌｌ９３ｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｉａａａ３．〇｛?ｃ〇ｎｆ?）ａ３ａａａｎ３９ｉａａＢｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌｌ３３３ｌｌｌｌ＿＾?＞?〇?■?￣ｖ－?ＩＤ?ＧＣＣＨＫＨＨＫＨＨＨＨＭＨＨ＞：ＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＨＨＨＨｈＨＨＨＨＨＨＨＣＣ?Ｐ?＊?：??ＡＳＱＥＥＦＥＲＡＡＫＹＶａＴＳＧＫ￡ＳＧＬＮＰＴＴＥ〇ＫＬＥＦＹＫＹＹＫ〇Ａ?ＡＡ?：?ＳＵＬＬＦｗＨＣＰＶ?Ｘ?ＥＩ?ＴＴＤＤＶＥＧＧＰＴＣＫＬＰＫ?．?ＦＮＥ１０?２０?３０?４０?５０?６０?７０３ｌｌｉｍｍｉｉ３３３３３３３ｌｌｌ９ａ３ｌｌｌｌｉｎｉｌｌｌｌｌｉ?Ｃｏｎ（?：?：｜｜｜｜｜３３３３３３｜？｜８１１８３３３｜｜｜｜｜｜｜９３９９＾?＾???Ｐｒ费ｄｓ??ｆｌ?）?“??ＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＨｈＨ．－ｉｈｎｈＨＣＣＣＣＣｈＨＨｈＨＨＨＨＨ?Ｆｚｔ－＾?：?ＣＣＣＣＣＪＣＣＣＨＨＨＭＭＨＨＭＨＭＨＣＣＣＣＣＣＣＣＣＣＨＭＶＧＯＣＳＥＰＡＰＧＦＬＡＦＥＡ

图３．２－５?ＴｇＡＣＢＰｌ和ＴｇＡＣＢＰ２的三级结构??箭头表示ＡＣＢＤ结构域中的“结合口袋”，橙色、亮绿色、浅绿色和蓝色球状结构分别代表保守性的丙氨酸、??甘氨酸、色氨酸和赖氨酸。??Ｆｉｇ?３．２－５?３Ｄ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ?ｏｆ?ＴｇＡＣＢＰｌ?ａｎｄ?ＴｇＡＣＢＰ２??Ｔｈｅ?ａｒｒｏｗ?ｉｎｄｉｃａｔｅｓ?ｔｈｅ?＂＇ｂｉｎｄｉｎｇ?ｐｏｃｋｅｆ?ｏｆ?ＡＣＢＤ?ｄｏｍａｉｎ．?Ｏｒａｎｇｅ，?ｌｉｍｅ，?ａｑｕａ?ａｎｄ?ｂｌｕｅ?ｂａｌｌｓ?ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ?Ａｌａ，?Ｇｌｙ，??Ｔｒｐ?ａｎｄ?Ｌｙｓ?ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．??．２?ＴｇＡＣＢＰｌ和ＴｇＡＣＢＰ２的克隆、表达与鉴定??以弓形虫ＲＨ反转录ｃＤＮＡ为模板，ＰＣＲ扩增，分别获得全长２８８ｂｐ、９３６ｂｐ的??ＡＣＢＰｌ和ＴｇＡＣＢＰ２，并连接到了Ｔ载体上（图３．２－６）。??Ａ???Ｂ???Ｃ????ｉ．＇本靈函??１００?ｉ〇〇ｂｐ－Ｃ??－?＇?１??……’＇


本文编号：3564195