卵黄抗体重链恒定区介导外源蛋白在蛋黄中表达的研究

发布时间：2022-01-21 12:07

　　应用转基因鸡作为生物反应器进行功能蛋白的生产具有广阔的应用前景,功能蛋白在蛋中靶向表达是理想的生产方式。本论文通过构建表达载体生产慢病毒,通过显微注射导入鸡胚制备转基因鸡,载体在CMV启动子控制下,外源蛋白与鸡卵黄抗体IgY抗体重链恒定区CH1-4融合,使表达的外源蛋白通过IgY抗体受体介导转位到蛋黄,探索转基因鸡作为生物反应器生产功能蛋白的可行性,为应用转基因鸡生产医用蛋白提供新途径和思路。利用分子生物学手段克隆得到鸡IgY重链恒定区基因,以EGFP为报告基因,选取pLOV.CMV.EGFP载体进行改造,构建真核表达载体,与包装质粒和包膜质粒共转染293T细胞,生产慢病毒,利用相对荧光定量PCR分析,获得的慢病毒滴度为7.06×108TU/mL。使用慢病毒感染鸡胚成纤维细胞系DF1,感染效率较高。分别在鸡胚13-14期外周血管和X期胚盘下腔注射1.5μL含有CMV启动子和EGFP报告基因的HIV-1型慢病毒溶液,血管注射组孵化率为84.2%,胚盘组孵化率0。通过荧光显微镜、RT-PCR、Western Blot等方法在血管注射组雏鸡的心脏、肝脏、脑、肾脏、肌胃、胸肌、性腺等组织器官中... 

【文章来源】：河南农业大学河南省

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

产蛋母鸡的输卵管[1]

河南农业大学硕士学位论文 录为双链DNA并可整合入宿主基因组内，因此，逆转录病毒是一种天然的基因传递系统。其原理是先将外源基因连接到逆转录病毒载体上，制成高滴度病毒颗粒，再感染胚胎或直接将胚胎与能释放逆转录病毒的单层细胞共同》育，可将其所携带的外源基因整合到动物基因组中[45]。逆转录病毒载体用于制备转基因鸡的不足是效率低且外源基因表达易沉默。一种新型的源于逆转录病毒的慢病毒（Lentivirus)载体克服了上述缺陷，其能够广泛感染分裂细胞和非分裂细胞并整合进宿主基因组内，该载体在转染效率和遗传稳定性上的优势己得到证实，以及在组织特异性表达方面的优势己有报道可作为有效的工具广泛用于基因-

Fig 3-4 Amplification of the target geneNA Marker； 1,溶1?(酶信号肽和EGFP基因连接产物片段1,人小约765 bp; 2，丨g恒定区基因，人小约1152 bp。体酶切

【参考文献】：
期刊论文
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博士论文
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硕士论文
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[2]鹌鹑胚胎早期PGCs迁移规律以及性腺发育的研究[D]. 程旭梅.扬州大学 2009
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本文编号：3600229