牛支原体灭活疫苗佐剂的筛选与培养基的改良

发布时间：2022-02-10 10:08

　　牛支原体（Mycoplasmabovis，M.bovis）是引起犊牛肺炎、关节炎和奶牛乳房炎的主要病原体，近年来，由牛支原体感染引起的相关疾病已蔓延至全世界，2010年以来，新疆北疆部分地区规模化牛场犊牛陆续出现严重的肺炎与关节炎，造成大批犊牛死亡，后经实验室诊断确定病原体为牛支原体。目前，国内尚无预防该病的商品化疫苗供生产应用，而抗生素治疗常存在盲目用药，疗效不确定等情况。为了解决上述问题本试验着重开展了以下研究：1.将分离并鉴定得到的牛支原体新疆分离菌株进行扩大培养制备灭活菌悬液，然后分别与弗氏完全佐剂、白油佐剂、氢氧化铝佐剂、蜂胶佐剂配合，制成灭活疫苗免疫小鼠，通过测定血清中的抗体水平来筛选免疫效果较好的疫苗佐剂。结果表明白油佐剂组的免疫增强效果最佳，产生的抗体水平最高，并且高抗体水平持续时间较长，可以作为牛支原体灭活疫苗的较理想佐剂。2.在常用牛心汤培养基基础上进行了改良，将配方中原有牛心汤进行了2倍浓缩并加入了DMEM和牛肺消化液，利用活菌计数法、菌体蛋白测定法、OD值测定法对牛支原体新疆分离株在改良后的液体培养基中不同培养阶段的生长滴度即颜色变化单位（CCU）、菌体蛋白量及... 

【文章来源】：石河子大学新疆维吾尔自治区211工程院校

【文章页数】：54 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
主要缩略词
目录
引言
第一章 文献综述牛支原体研究概况
    1 支原体研究概况
        1.1 支原体培养特性
        1.2 支原体形态特征
        1.3 支原体的致病性
        1.4 支原体的抗原结构
        1.5 支原体的抵抗力
    2 主要畜禽支原体
        2.1 牛肺疫
        2.2 猪喘气病
        2.3 鸡慢性呼吸道疾病
        2.4 山羊传染性胸膜肺炎
    3 牛支原体研究进展
        3.1 流行病学
        3.2 病原学
        3.3 致病性
            3.3.1 毒力因子
            3.3.2 牛支原体诱导的免疫反应
        3.4 临床症状与病理变化
            3.4.1 临床症状
            3.4.2 病理变化
        3.5 鉴别诊断
            3.5.1 病原分离鉴定
            3.5.2 血清学诊断
            3.5.3 基因诊断
        3.6 感染模型
        3.7 疫病防控
            3.7.1 加强检疫监管
            3.7.2 严格封锁和隔离
            3.7.3 认真做好消毒灭源
            3.7.4 加强饲养管理
        3.8 疫苗研制
        3.9 结语
第二章 试验研究
    试验一 牛支原体灭活疫苗免疫小鼠最佳免疫剂量的研究
        1 材料与方法
            1.1 材料
            1.2 设备
            1.3 免疫方法
            1.4 IHA检测血清血凝效价
                1.4.1 抗原制备
                1.4.2 绵羊红细胞采集
                1.4.3 红细胞的醛化、鞣酸化和抗原致敏
                1.4.4 IHA操作步骤与判定标准
        2 结果与分析
        3 讨论
        4 小结
    试验二 四种佐剂对牛支原体灭活疫苗免疫小鼠抗体水平的研究
        1. 材料与方法
            1.1 材料
                1.1.1 试验菌株及试验动物
                1.1.2 培养基
                1.1.3 设备
                1.1.4 佐剂及其制备
                1.1.5 ELISA检测主要试剂
        2 方法
            2.1 抗原制备
            2.2 牛支原体灭活佐剂疫苗的制备
            2.3 免疫方法及血样采集
            2.4 ELISA检测血清抗体效价
                2.4.1 包被抗原的制备
                2.4.2 阴性血清制备
                2.4.3 阳性血清制备
                2.4.4 酶标板预处理
                2.4.5 抗原最佳包被浓度和血清最佳稀释倍数测定
                2.4.6 酶标二抗最佳工作浓度的确定
                2.4.7 临界值的确定
                2.4.8 抗体效价检测
        3 结果与分析
            3.1 疫苗稳定性及无菌检验
            3.2 疫苗安全性检验
            3.3 抗原、血清最佳工作浓度
            3.4 酶标二抗最佳工作浓度
            3.5 临界值的确定
            3.6 疫苗抗体水平检测
        4 讨论
            4.1 不同佐剂疫苗免疫部位的局部反应
            4.2 不同佐剂疫苗抗体水平的差异
        5 小结
    试验三 牛支原体常用牛心汤培养基的改良极其培养效果研究
        1 材料和方法
            1.1 菌株
            1.2 仪器
            1.3 培养基
            1.4 菌种的复苏
            1.5 活菌计数CCU的测定
            1.6 菌体蛋白测定
            1.7 OD值的测定
            1.8 平板菌落计数CFU的测定
        2 结果与分析
            2.1 活菌计数CCU结果
            2.2 菌体蛋白测定结果
            2.3 OD值测定结果
            2.4 平板菌落计数CFU的测定结果
        3 讨论
        4 小结
    试验四 八种抗菌药物对牛支原体的体外最小抑菌浓度研究
        1. 材料与方法
            1.1 药品试剂
            1.2 培养基
            1.3 仪器
            1.4 菌种
            1.5 颜色变化单位（CCU）的测定
            1.6 最小抑菌浓度（MIC）的测定
        2 结果与分析
            2.1 颜色变化单位（CCU）的测定
            2.2 最小抑菌浓度（MIC）的测定
        3 讨论
        4 小结
第三章 论文结论与创新点
    论文结论
    创新点
参考文献
致谢
作者简介
导师评阅表


【参考文献】：
期刊论文
[1]牛支原体生长曲线的测定和培养基筛选[J]. 邵倩,储岳峰,何生虎,逯忠新.  湖北农业科学. 2012(03)
[2]致犊牛肺炎和关节炎牛支原体新疆株的分离与鉴定[J]. 姚永进,剡根强,王静梅,范伟兴,李岩.  中国畜牧兽医. 2011(12)
[3]3种ELISA试剂盒检测抗牛支原体抗体的比较[J]. 刘洋,陈维,宋志强,孙文静,李媛,邹小辉,辛九庆.  中国预防兽医学报. 2011(06)
[4]牛支原体、无乳支原体和丝状支原体丝状亚种小克隆三重PCR检测方法的建立及初步应用[J]. 李大伟,黄灿平,张彦明,谢建华,冉智光,熊仲良,范伟兴.  畜牧兽医学报. 2011(02)
[5]副猪嗜血杆菌灭活疫苗佐剂的筛选[J]. 罗添添,岳华,汤承.  四川畜牧兽医. 2010(11)
[6]鸭疫里默氏菌3种不同佐剂灭活疫苗免疫效果比较[J]. 林丽超,陈建红,黄得纯,张济培,司兴奎.  中国兽医杂志. 2010(03)
[7]我国部分地区牛支原体肺炎和关节炎的病原体诊断[J]. 冉智光,谢建华,骆璐,杨泽林,凌洪权,苏承忠,熊仲良,范伟兴,米自由.  中国预防兽医学报. 2010(01)
[8]牛支原体套式PCR检测方法的建立[J]. 李媛,董惠,张美晶,陈超,曹培丽,郭丹,姜海芳,辛九庆.  中国预防兽医学报. 2009(09)
[9]牛支原体病研究进展[J]. 胡长敏,石磊,龚瑞,白智迪,郭爱珍.  动物医学进展. 2009(08)
[10]山羊支原体性肺炎研究进展[J]. 宋维发.  中国畜禽种业. 2009(06)

博士论文
[1]牛传染性胸膜肺炎诊断技术与分子流行病学研究[D]. 辛九庆.吉林农业大学 2007

硕士论文
[1]猪肺炎支原体MY-99株的培养特性、致病性及免疫原性研究[D]. 张莉.四川农业大学 2008
[2]绵羊肺炎支原体的分离鉴定与敏感药物试验的研究[D]. 白永平.四川农业大学 2007
[3]绵羊肺炎支原体山东株的分离鉴定和标准株外膜蛋白特性研究[D]. 王建昌.山东农业大学 2007



本文编号：3618710