食蟹猴—猪异种体细胞核移植的研究

发布时间：2022-02-10 12:48

　　异种核移植可能成为保护高度濒危动物,建立治疗性克隆非人灵长类动物模型和核质互作关系研究动物模型的一种有效方法。可以避免人类治疗性克隆研究中的伦理、法律和临床上的实验限制。本研究利用核移植技术,将食蟹猴耳部皮肤成纤维细胞融于去核猪卵母细胞中,经融合和活化后,体外培养,并进行了相关的研究。1.应用组织块培养法从年龄4岁的雄性食蟹猴耳皮肤进行原代和传代培养,成功建立了耳缘组织成纤维细胞系。单个细胞均为典型梭形细胞,抗波形蛋白免疫荧光染色显示为阳性,抗角形蛋白免疫荧光染色为阴性,分离到的细胞为耳部成纤维细胞,免疫细胞化学分析了培养细胞的微管蛋白表达情况,结果显示培养细胞具有良好的细胞骨架系统,从另一侧面反映了培养条件比较适合于食蟹猴耳成纤维细胞的生长。绘制的细胞生长曲线呈“S”型,细胞生长经历了潜伏期、指数生长期和停滞期,符合体外细胞生长规律。该成纤维细胞染色体数2n=42,并分析了5、10、30代染色体数,2n所站的比率分别为90.16%、86.20%、83.07%。用含10%FBS和10%DMSO的DMEM为冷冻液,解冻后细胞活率经FDA/PI染色检测,细胞活率都在93%以上,传代后细胞生... 

【文章来源】：广西大学广西壮族自治区211工程院校

【文章页数】：173 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
第一章 文献综述
    引言
    1 哺乳动物细胞核移植的研究进展
        1.1 早期的核移植研究
        1.2 哺乳动物胚胎细胞核移植
        1.3 哺乳动物体细胞核移植
        1.4 哺乳动物异种核移植研究
    2 哺乳动物核移植的研究方法
        2.1 受核细胞的去核
            2.1.1 盲吸去核法
            2.1.2 活体荧光染色去核
            2.1.3 化学辅助去核
            2.1.4 应用偏光显微镜(Pol-Scope)去核
            2.1.5 半卵切割去核
        2.2 供核细胞的准备
        2.3 核移植重构胚胎的构建
        2.4 核移植胚胎的体外培养及胚胎移植
        2.5 提高核移植效率的途径
            2.5.1 连续核移植
            2.5.2 四倍体补偿方法
            2.5.3 细胞抽提物处理
            2.5.4 供体细胞进行移植前药物处理
    3. 哺乳动物体细胞核移植的机理研究
        3.1 发育相关基因、基因簇的研究
        3.2 核重建(NUCLEAR REMODELING)
        3.3 体细胞供体核重新程序化
        3.4 细胞周期调控
        3.5 基因印迹(IMPRINTING)
        3.6 端粒和端粒酶
    4. 动物核移植技术的应用
        4.1 转基因动物生产
        4.2 治疗性克隆
        4.3 其它方面的应用
    5 参考文献
第二章 食蟹猴耳皮肤成纤维细胞的培养及其生物学特性研究
    摘要
    Abstract
    前言
    1 材料与方法
    2. 结果
    3. 讨论
    4. 小结
    5 参考文献
第三章 食蟹猴耳皮肤成纤维细胞细胞周期调控
    摘要
    Abstract
    前言
    1 材料与方法
    2. 结果
    3. 讨论
    4. 小结
    5. 参考文献
    6. 图版
第四章 食蟹猴耳部皮肤成纤维细胞表观遗传学修饰
    摘要
    Abstract
    前言
    1. 材料与方法
    2. 实验设计
    3. 结果
    4. 讨论
    5. 小结
    6. 参考文献
    7. 图版
第五章 食蟹猴-猪异种重构胚胎体外发育以及线粒体命运的初步研究
    摘要
    Abstract
    前言
    1. 材料与方法
    2. 结果
    3. 讨论
    4. 小结
    5. 参考文献
    6. 图版
英文缩写-中文对照表
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3618918