猪源和羊源沙门菌的分离鉴定及延迟减毒疫苗载体的构建
发布时间：2022-02-10 13:47
沙门菌是最常见的食源性致病菌之一,其危害范围极大,能够引起各类农产品的污染。目前,沙门菌所造成的食品污染是国际上极为关注的食品安全问题,据估计,美国每年由于沙门菌属细菌感染的病例约为140万[1],在中国细菌性食物中毒中有70%～80%是由食入沙门菌而引起,研究其在食品动物中的污染及分布现状具有重要的公共卫生意义。本研究对江苏省某生猪屠宰场猪源病料,羊屠宰场以及部分猪场送检样品的沙门菌进行了分离鉴定,通过药敏试验和耐药基因检测,初步掌握了所分离的沙门菌耐药表型,分离菌株耐药表型与其所携带耐药基因之间的关系。研究结果有利于指导生产实践中抗菌药物的合理应用,同时也能为沙门菌引起的公共卫生安全和农产品安全问题的研究提供基础。沙门菌作为一种侵袭性胞内菌,经减毒后具备强大的侵袭潜力,在宿主体内缓慢生长,能够有效、持续地刺激机体产生强有力的细胞、体液以及局部黏膜免疫应答。本论文在分离株中筛选出1株鼠伤寒沙门菌强毒株rSC0032;在其中分别引入APcrp::TTaraCPBAD crp,△sopB及△pmi突变,构建成延迟减毒的重组沙门菌,命名为rSC0117;以BALB/c小鼠为实验动物,评价了...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２沙门菌分离株的菌体形态??Ｆｉ．?１－２?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｍｏｒｈｏｌｏｏｆ?Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ?ｉｓｏｌａｔｅｓ??
３．２?ＰＣＲ鉴定沙门菌属??沙门菌属及／ｍｚ基因的扩增结果中，总计８６株菌株能够扩增出约２６０?ｂｐ与４９５ｂｐ??的ＤＮＡ片段，表明所分离菌中有８６株沙门菌。扩增结果如图１－３。??猪源样品中肝脏、肠道及粪便的分离率分别为８．４３％?（１４／１６６）、２７．８３％?（６４／２３０）、??３．１７％?（２／６３）；羊源样品中分离到１株沙门菌（２．６３％）；其余送检样品中分离到５株沙??门菌。??Ｍ?１?２?３?４?５??■??图１－３加（２５０ｂｐ），?；ｎ＜４９５ｂｐ）基因扩增结果??Ｍ：?ＤＬ２０００ＤＮＡｍａｒｋｅｒ；?１：阳性对照；３：阳性结果；２，４，５：阴性结果??Ｆｉｇ．?１－３?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｓｔｎ?ａｎｄ?ｈｕｔ?ｇｅｎｅｓ??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ；?１：?Ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ；?３：?Ｐｏｓｉｔｉｖｅ；?２，４？５：?Ｎｅｇａｔｉｖｅ??３．３血清型分布??分离到的８６株沙门菌，编号ｒＳＣ００３１？ｒＳＣ０１１６，经血清型鉴定，其中３５株为德尔沙门菌，１６株为里森沙门菌，１１株为纽兰沙门菌，１１株为鼠伤寒沙门菌，４株为猪霍乱门菌，３株为新斯托夫沙门菌，３株为恩昌加沙门菌，２株为彻斯特沙门菌，１株无法确定属于Ｅ１群；８６株分离株中ｒＳＣ００６０为羊源分离株，其余均分离自猪源样本。所有分离株??均分布于Ｂ群（５５．８１％）、Ｃ１群（２３．２６％）及Ｅ１群（２０．９３％）
以ｒＳＣ００３２（ＡＰｅｒｐ：：ＴＴ?ａｒａＣ?ＰＢＡＤ?ｃｒｐ）为受体菌，Ｘ７２１３（ｐＳ００６）为供体菌进行细菌的结合，??对接合突变体菌落用表３－２中Ａ５＿ｏ／７＿ｇ－Ｆ、Ａ知；ｘ８－Ｒ引物进行菌落ＰＣＲ鉴定，缺失株??阳性菌的ＰＣＲ片段大小为５９３ｂｐ，阴性菌的ＰＣＲ片段大小为２２９１ｂｐ?（图３－２），表明??ｒＳＣ００３２（ＡＰｃｒｐ：：ＴＴ?ａｒａＣ?Ｐｂａｄ?ｃｒ；？，构建成功。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]新疆乌鲁木齐市周边鸡场鸡源沙门氏菌耐药性及耐药基因的检测[J]. 关茹飞,江萍,高超,夏利宁. 中国农业科技导报. 2017(10)
[2]肉鸡屠宰生产链中的沙门氏菌耐药基因检测及耐药相关性分析[J]. 孙璐,王娟,黄秀梅,曲志娜,王君玮,杨瑞梅,郑增忍. 中国动物检疫. 2017(01)
[3]猪源沙门氏菌的分离鉴定与耐药性分析[J]. 王伟,张双翔,周碧君,胡兴义,张海,文明,程振涛,王开功. 贵州畜牧兽医. 2016(06)
[4]贵州省猪源沙门氏菌对β-内酰胺类药耐药性及耐药基因分析[J]. 曹正花,谭艾娟,吕世明,王雄,杜国琴. 中国畜牧兽医. 2016(07)
[5]204例儿童感染鼠伤寒沙门氏菌临床分析[J]. 梁燕霞,李小南,伍绍东. 中国实用医药. 2016(17)
[6]福州市生食蔬菜沙门氏菌污染状况分析[J]. 吕新,陈丽华,李玥仁. 福建农业学报. 2016(03)
[7]鸡源致病性沙门氏菌的分离鉴定及血清型和药物敏感性分析[J]. 施开创,李凤梅,邹联斌,许心婷,王海清,钟诚. 中国畜牧兽医. 2015(08)
[8]羊源O78型大肠杆菌的分离及16S rDNA序列分析[J]. 吴忆春. 中国畜牧兽医. 2014(05)
[9]禽源致病性沙门氏菌耐药表型与耐药基因的分析[J]. 戴建华,吴植,袁维峰. 中国畜牧兽医. 2014(04)
[10]广西食源性与禽源性沙门氏菌血清型分布及耐药性研究[J]. 诸葛石养,韦程媛,李秀桂. 中国热带医学. 2013(09)
硕士论文
[1]鸡源沙门氏菌耐药性、致病性与毒力基因相关性分析[D]. 王德宁.东北农业大学 2014
本文编号：3618995
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
图１－２沙门菌分离株的菌体形态??Ｆｉ．?１－２?Ｂａｃｔｅｒｉａｌ?ｍｏｒｈｏｌｏｏｆ?Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ?ｉｓｏｌａｔｅｓ??
３．２?ＰＣＲ鉴定沙门菌属??沙门菌属及／ｍｚ基因的扩增结果中，总计８６株菌株能够扩增出约２６０?ｂｐ与４９５ｂｐ??的ＤＮＡ片段，表明所分离菌中有８６株沙门菌。扩增结果如图１－３。??猪源样品中肝脏、肠道及粪便的分离率分别为８．４３％?（１４／１６６）、２７．８３％?（６４／２３０）、??３．１７％?（２／６３）；羊源样品中分离到１株沙门菌（２．６３％）；其余送检样品中分离到５株沙??门菌。??Ｍ?１?２?３?４?５??■??图１－３加（２５０ｂｐ），?；ｎ＜４９５ｂｐ）基因扩增结果??Ｍ：?ＤＬ２０００ＤＮＡｍａｒｋｅｒ；?１：阳性对照；３：阳性结果；２，４，５：阴性结果??Ｆｉｇ．?１－３?ＰＣＲ?ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｓｔｎ?ａｎｄ?ｈｕｔ?ｇｅｎｅｓ??Ｍ：?ＤＬ２０００?ＤＮＡ?ｍａｒｋｅｒ；?１：?Ｐｏｓｉｔｉｖｅ?ｃｏｎｔｒｏｌ；?３：?Ｐｏｓｉｔｉｖｅ；?２，４？５：?Ｎｅｇａｔｉｖｅ??３．３血清型分布??分离到的８６株沙门菌，编号ｒＳＣ００３１？ｒＳＣ０１１６，经血清型鉴定，其中３５株为德尔沙门菌，１６株为里森沙门菌，１１株为纽兰沙门菌，１１株为鼠伤寒沙门菌，４株为猪霍乱门菌，３株为新斯托夫沙门菌，３株为恩昌加沙门菌，２株为彻斯特沙门菌，１株无法确定属于Ｅ１群；８６株分离株中ｒＳＣ００６０为羊源分离株，其余均分离自猪源样本。所有分离株??均分布于Ｂ群（５５．８１％）、Ｃ１群（２３．２６％）及Ｅ１群（２０．９３％）
以ｒＳＣ００３２（ＡＰｅｒｐ：：ＴＴ?ａｒａＣ?ＰＢＡＤ?ｃｒｐ）为受体菌，Ｘ７２１３（ｐＳ００６）为供体菌进行细菌的结合，??对接合突变体菌落用表３－２中Ａ５＿ｏ／７＿ｇ－Ｆ、Ａ知；ｘ８－Ｒ引物进行菌落ＰＣＲ鉴定，缺失株??阳性菌的ＰＣＲ片段大小为５９３ｂｐ，阴性菌的ＰＣＲ片段大小为２２９１ｂｐ?（图３－２），表明??ｒＳＣ００３２（ＡＰｃｒｐ：：ＴＴ?ａｒａＣ?Ｐｂａｄ?ｃｒ；？，构建成功。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]新疆乌鲁木齐市周边鸡场鸡源沙门氏菌耐药性及耐药基因的检测[J]. 关茹飞,江萍,高超,夏利宁. 中国农业科技导报. 2017(10)
[2]肉鸡屠宰生产链中的沙门氏菌耐药基因检测及耐药相关性分析[J]. 孙璐,王娟,黄秀梅,曲志娜,王君玮,杨瑞梅,郑增忍. 中国动物检疫. 2017(01)
[3]猪源沙门氏菌的分离鉴定与耐药性分析[J]. 王伟,张双翔,周碧君,胡兴义,张海,文明,程振涛,王开功. 贵州畜牧兽医. 2016(06)
[4]贵州省猪源沙门氏菌对β-内酰胺类药耐药性及耐药基因分析[J]. 曹正花,谭艾娟,吕世明,王雄,杜国琴. 中国畜牧兽医. 2016(07)
[5]204例儿童感染鼠伤寒沙门氏菌临床分析[J]. 梁燕霞,李小南,伍绍东. 中国实用医药. 2016(17)
[6]福州市生食蔬菜沙门氏菌污染状况分析[J]. 吕新,陈丽华,李玥仁. 福建农业学报. 2016(03)
[7]鸡源致病性沙门氏菌的分离鉴定及血清型和药物敏感性分析[J]. 施开创,李凤梅,邹联斌,许心婷,王海清,钟诚. 中国畜牧兽医. 2015(08)
[8]羊源O78型大肠杆菌的分离及16S rDNA序列分析[J]. 吴忆春. 中国畜牧兽医. 2014(05)
[9]禽源致病性沙门氏菌耐药表型与耐药基因的分析[J]. 戴建华,吴植,袁维峰. 中国畜牧兽医. 2014(04)
[10]广西食源性与禽源性沙门氏菌血清型分布及耐药性研究[J]. 诸葛石养,韦程媛,李秀桂. 中国热带医学. 2013(09)
硕士论文
[1]鸡源沙门氏菌耐药性、致病性与毒力基因相关性分析[D]. 王德宁.东北农业大学 2014
本文编号：3618995
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