猪鼻支原体3-磷酸甘油醛脱氢酶表达及黏附细胞功能研究
发布时间：2022-02-11 17:39
利用原核表达载体pET-28a（+）构建猪鼻支原体（Mycoplasma hyorhinis, Mhr）的3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）重组表达菌,研究GAPDH黏附宿主细胞的功能。结果表明:成功构建了表达rMhr-GAPDH的重组工程菌,利用IPTG诱导蛋白表达,镍柱亲和层析纯化,成功获得高纯度的rMhr-GAPDH重组蛋白。用重组蛋白免疫家兔制备多克隆抗体,对Mhr液体培养物和固体菌落进行免疫杂交,均可检测到GAPDH,提示其可表达于菌体表面。将rMhr-GAPDH蛋白与人气道上皮细胞NCI-H292共孵育,利用间接免疫荧光试验可检测到黏附在细胞上的重组蛋白,利用微孔板黏附试验进一步证明rMhr-GAPDH蛋白与细胞膜蛋白的结合具有剂量依赖性,并可为其抗体所抑制。该研究构建表达和纯化了Mhr的GAPDH重组蛋白,检测到其在菌体表面的表达,并证明其具有黏附细胞能力,这有助于进一步研究Mhr黏附感染的致病机制。
【文章来源】：扬州大学学报(农业与生命科学版). 2020,41(03)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
重组质粒pET-28a-rMhr-GAPDH的构建（A）和rMhr-GAPDH重组蛋白表达纯化（B)
利用制备的兔源GAPDH多抗，通过间接免疫荧光试验检测GAPDH在Mhr表面的表达，结果（图2）显示，在不破坏细胞膜的情况下加入抗rMhr-GAPDH阳性血清孵育的Mhr有明显的绿色荧光信号，而加入阴性血清孵育的Mhr无荧光信号；同时，通过菌落免疫杂交试验进行检测，结果（图3）显示，在不破坏细胞膜的情况下高免兔血清抗体可与PVDF膜上的Mhr单菌落杂交出现明显的阳性杂交点，而阴性血清无杂交反应。结果提示GAPDH蛋白可表达在Mhr菌体表面。2.3 间接免疫荧光试验检测rMhr-GAPDH的黏附细胞能力
向培养NCI-H292的细胞孔中加入rMhr-GAPDH蛋白共同孵育，用间接免疫荧光法检测黏附情况，结果（图4）显示，rMhr-GAPDH蛋白组可明显观察到绿色荧光信号，而BSA蛋白对照组无阳性信号，说明rMhr-GAPDH可黏附NCI-H292细胞。2.4 微孔板黏附试验检测rMhr-GAPDH与细胞膜蛋白的结合能力
【参考文献】：
期刊论文
[1]Mycoplasma infections and different human carcinomas[J]. Su Huang; Ji You Li; Jan Wu; Lin Meng; Cheng Chao Shou Beijing Institute for Cancer Research, Peking University School of Oncology, Beijing 100034. ChinaSu Huang, received B. A from Jiangxi Medical College of China in 1994. Now she is a graduate student pursuing a Ph. D degree at the Peking University School of Oncology.. World Journal of Gastroenterology. 2001(02)
本文编号：3620685
【文章来源】：扬州大学学报(农业与生命科学版). 2020,41(03)北大核心
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
重组质粒pET-28a-rMhr-GAPDH的构建（A）和rMhr-GAPDH重组蛋白表达纯化（B)
利用制备的兔源GAPDH多抗，通过间接免疫荧光试验检测GAPDH在Mhr表面的表达，结果（图2）显示，在不破坏细胞膜的情况下加入抗rMhr-GAPDH阳性血清孵育的Mhr有明显的绿色荧光信号，而加入阴性血清孵育的Mhr无荧光信号；同时，通过菌落免疫杂交试验进行检测，结果（图3）显示，在不破坏细胞膜的情况下高免兔血清抗体可与PVDF膜上的Mhr单菌落杂交出现明显的阳性杂交点，而阴性血清无杂交反应。结果提示GAPDH蛋白可表达在Mhr菌体表面。2.3 间接免疫荧光试验检测rMhr-GAPDH的黏附细胞能力
向培养NCI-H292的细胞孔中加入rMhr-GAPDH蛋白共同孵育，用间接免疫荧光法检测黏附情况，结果（图4）显示，rMhr-GAPDH蛋白组可明显观察到绿色荧光信号，而BSA蛋白对照组无阳性信号，说明rMhr-GAPDH可黏附NCI-H292细胞。2.4 微孔板黏附试验检测rMhr-GAPDH与细胞膜蛋白的结合能力
【参考文献】：
期刊论文
[1]Mycoplasma infections and different human carcinomas[J]. Su Huang; Ji You Li; Jan Wu; Lin Meng; Cheng Chao Shou Beijing Institute for Cancer Research, Peking University School of Oncology, Beijing 100034. ChinaSu Huang, received B. A from Jiangxi Medical College of China in 1994. Now she is a graduate student pursuing a Ph. D degree at the Peking University School of Oncology.. World Journal of Gastroenterology. 2001(02)
本文编号：3620685
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