MSTN基因敲除滩羊的制备与评价

发布时间：2022-02-22 23:24

　　近年来,CRISPR/Cas9技术快速发展,其作为靶向基因组修饰的有效工具,引入特定的DNA双链断裂（DSB）,再通过内源DNA修复机制完成修复。CRISPR/Cas9系统被广泛地运用于动物遗传工程,在动物基因组中产生敲除、插入和点突变。相比于传统的ZFN和TALEN基因编辑技术,其效率更高且序列选择的限制更少（基因组中只需要GG）,它的构建程序简单方便,适用于大规模的动物基因编辑。绵羊是一种重要的经济动物,同时也是遗传病生物医学中不可或缺的大动物模型。在绵羊基因组中应用基因编辑技术可以促进品种改良,提高家畜育种水平,使动物表型快速向人们期望的方向变化。肌肉发育是家畜的重要经济特征之一,而肌肉生长抑制素（MSTN）基因被认为是与肌肉发育和瘦肉率相关的主要基因。在大多数研究中,通过设计sgRNA来靶向至目的基因,从而实现基因敲除。然而,较少的基因碱基突变对目的基因的功能影响可能很小,特别是对杂合子羊或嵌合体羊。因此,进一步研究大的基因片段敲除是有必要的。因此,本试验旨在利用CRISPR/Cas9系统来对绵羊的MSTN基因进行敲除以探究其作用效果。本研究以宁夏滩羊为对象,选择肌肉生长抑制素... 

【文章来源】：西北农林科技大学陕西省211工程院校985工程院校教育部直属院校

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 基因编辑技术-CRISPR/Cas9 技术
        1.1.1 CRISPR/Cas9 系统的发展和应用
        1.1.2 CRISPR/Cas9 系统的基本工作特点
        1.1.3 CRISPR/Cas9 系统的应用
        1.1.4 动物遗传育种方面的应用
    1.2 MSTN基因研究进展
        1.2.1 MSTN的结构分析
        1.2.2 MSTN的作用机制
        1.2.3 MSTN的功能和应用
    1.3 研究目的与意义
第二章 MSTN基因敲除滩羊的制备与评价
    2.1 材料与方法
        2.1.1 试验动物
        2.1.2 sgRNA载体质粒的构建
        2.1.3 细胞培养与转染
        2.1.4 细胞编辑效率检测
        2.1.5 脱靶检测
        2.1.6 T-A单克隆基因分型
        2.1.7 Cas9mRNA的体外转录
        2.1.8 sgRNA的体外转录
        2.1.9 受精卵显微注射Cas9mRNA和 sgRNA
        2.1.10 新生羔羊的基因编辑效率检测
        2.1.11 基因编辑羔羊的脱靶效应检测
        2.1.12 Western印迹分析
        2.1.13 基因编辑绵羊表型分析
    2.2 结果与分析
        2.2.1 胎儿成纤维细胞的MSTN基因敲除效率验证
        2.2.2 CRISPR/Cas9 介导的基因编辑绵羊的效率验证
        2.2.3 CRISPR/Cas9 介导的基因编辑绵羊的脱靶效应检测
        2.2.4 MSTN基因敲除绵羊肌肉组织中MSTN表达分析
        2.2.5 CRISPR/Cas9 系统介导的基因敲除滩羊的表型分析
    2.3 讨论
    2.4 小结
第三章 结论
    3.1 研究结论
    3.2 创新点
    3.3 下一步的研究内容
参考文献
附录
致谢
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]同源重组及非同源末端连接修复途径介导的基因编辑:CRISPR技术的认知、应用及展望[J]. 朱娉慧,罗群,王曜峰,冯波.  生命科学. 2018(09)
[2]基因编辑技术[J]. 胡小丹,游敏,罗文新.  中国生物化学与分子生物学报. 2018(03)
[3]基因编辑技术及其在畜牧业中的应用研究进展[J]. 李莉,毕延震,华再东,任红艳,肖红卫,刘西梅,郑新民.  基因组学与应用生物学. 2016(12)
[4]CRISPR/Cas9系统在鸡MSTN上的效率验证[J]. 胡曼,康倩倩,胡晓湘,李宁.  中国家禽. 2016(07)
[5]力竭运动及恢复期间大鼠骨骼肌及心肌MSTN、TGF-β、PDGF含量的变化[J]. 潘同斌,唐芳,李娜,马兵,仝昕炜.  中国运动医学杂志. 2015(11)
[6]基因组编辑技术研究新进展[J]. 毛超,陶永光.  生命的化学. 2015(01)
[7]基因编辑技术在基因治疗中的应用进展[J]. 季海艳,朱焕章.  生命科学. 2015(01)
[8]滩羊毛皮特性及毛囊发育相关基因的研究进展[J]. 额尔和花,丁伟,李颖康,王天新.  畜牧与饲料科学. 2010(05)
[9]猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒主要结构蛋白基因在持续感染中的遗传变异分析[J]. 李军,杨威,曾芸,张远波,陈泽祥,黄伟坚.  中国兽医杂志. 2009(06)
[10]我国的珍贵绵羊品种[J]. 金江.  当代畜禽养殖业. 1999(08)

博士论文
[1]基于CRISPR/Cas9的猪胚胎成纤维细胞基因组编辑及MSTN基因遗传修饰猪的制备[D]. 王侃侃.吉林大学 2018
[2]双sgRNA策略便利于CRISPR/Cas9系统介导的基因组改造和动物模型构建[D]. 周建奎.南京大学 2016

硕士论文
[1]滩羊羔羊早期补饲以及不同体重阶段羊肉品质的研究[D]. 侯鹏霞.宁夏大学 2014
[2]滩羊肉品质研究[D]. 钱文熙.宁夏大学 2005



本文编号：3640393