IGF-1调控RBM3表达抑制低温应激诱导牦牛卵丘细胞凋亡

发布时间：2022-07-13 20:39

　　【目的】探索动物机体遭受低温应激及细胞冷冻过程中胰岛素样生长因子1（insulin-like growth factor, IGF-1）与RNA结合基序蛋白3（RNA-binding motif protein 3, RBM3）之间的作用关系,及IGF-1参与哺乳动物细胞抑制低温损伤的机制。【方法】体外培养牦牛卵丘细胞,采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR, qRT-PCR）、蛋白免疫印迹（Western blot, WB）和免疫荧光技术检测不同浓度(0、50、100、200ng·mL^-1)IGF-1和低温应激（30℃、25℃）对RBM3表达影响。卵丘细胞经最佳浓度IGF-1(100 ng·mL^-1)和对照组（0IGF-1）作用30 h后,低温（30℃、25℃）应激8 h,比较RBM3表达水平。评估在低温应激组、100 ng·m L^-1 IGF-1处理组和100 ng·mL^-1 IGF-1+RBM3抑制剂处理组,卵丘细胞25℃应激8 h后凋亡水平差异,并从基因... 

【文章页数】：12 页

【文章目录】：
0 引言
1 材料与方法
    1.1 主要试剂
    1.2 牦牛卵丘细胞分离培养
    1.3 IGF-1和低温应激分别处理卵丘细胞
    1.4 不同处理组卵丘细胞凋亡率的检测
    1.5 RBM3、Bax、Bcl-2 mRNA表达检测
        1.5.1 细胞总RNA提取与c DNA合成
        1.5.2 Real-time PCR检测RBM3、Bax、Bcl-2的表达
    1.6 RBM3、Bax、Bcl-2蛋白表达Western blot检测
    1.7 RBM3蛋白定位检测
    1.8 数据分析
2 结果
    2.1 IGF-1及CAPE对牦牛卵丘细胞RBM3表达的调节
    2.2 低温应激对不同处理组牦牛卵丘细胞RBM3表达的调节
    2.3 RBM3蛋白在不同处理组卵丘细胞分布的检测
    2.4 不同处理组后卵丘细胞凋亡率的检测
    2.5不同处理组卵丘细胞低温应激后Bax和Bcl-2表达的变化
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]EGF对牦牛冻精运动性能、细胞凋亡和IVF胚胎发育潜力的影响[J]. 潘阳阳,王萌,余四九,崔燕,何俊峰.  畜牧兽医学报. 2017(05)
[2]冷应激条件下猪睾丸细胞中RNA结合基序蛋白3过表达对Caspase 3表达的影响[J]. 李云龙,李俭,李昌盛,李静辉,孟宇,杨焕民,李士泽.  中国应用生理学杂志. 2016(02)
[3]胰岛素样生长因子-1（IGF-1）对牦牛卵丘细胞热休克蛋白70（HSP70）表达的影响及其与细胞凋亡的关联性分析[J]. 潘阳阳,崔燕,樊江峰,李谷月,余四九.  农业生物技术学报. 2015(09)



本文编号：3660730