定时输精技术对妊娠早期后备母猪子宫发育的影响及差异miRNA筛选与鉴定

发布时间：2022-07-14 10:21

　　定时输精技术对提高母猪配种利用率、减少非生产天数、组织批次化生产具有重要意义。为探究定时输精程序处理对母猪繁殖性能的影响机制,本研究选取健康后备母猪12头,分为试验组（T）和对照组（C）,试验组采用烯丙孕素+PMSG+GnRH处理,对照组不采用任何激素处理,于妊娠第16 d和25 d对母猪进行屠宰,采集子宫内膜组织作为研究对象,分别记为T₁6组（3头）、C₁6组（3头）、T₂5组（3头）、C₂5组（3头）。首先观察子宫内膜组织形态学变化,随后对附植位点子宫内膜进行高通量测序获得miRNA表达谱,比较组织发育和miRNA表达的差异来探究定时输精影响后备母猪繁殖性能的机制。主要结果如下:定时输精程序处理对子宫内膜厚度、微血管和腺体的发育均有一定影响,与对照组相比,无论是妊娠第16d还是妊娠第25 d,试验组后备母猪子宫内膜厚度增加,血管更加致密丰富,腺体发育更发达,在固有层中分布更均匀,这些变化更有利于早期胚胎的附植。通过对妊娠后备母猪子宫内膜组织进行高通量测序,建立了子宫内膜miRNA的表达谱,对测序... 

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
1 引言
    1.1 定时输精与产仔数
    1.2 miRNA与早期妊娠
        1.2.1 miRNA与胚胎活性
        1.2.2 妊娠子宫内膜中的miRNA
        1.2.3 母猪妊娠调节中的miRNA
        1.2.4 miR-424及其功能
    1.3 母猪妊娠建立与胚胎丢失
        1.3.1 趋化因子在妊娠早期胚胎丢失中的作用
        1.3.2 早期妊娠母体-胎儿界面免疫细胞的富集
        1.3.3 外泌体在细胞通讯间的作用
    1.4 本试验研究意义
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验仪器
        2.1.2 试验试剂
        2.1.3 主要溶液的配制
    2.2 试验动物的选择及样品采集、处理
        2.2.1 试验母猪的选择
        2.2.2 试验母猪的处理
        2.2.3 子宫内膜的采集
        2.2.4 石蜡切片制作及染色
        2.2.5 总RNA的提取
    2.3 子宫内膜转录组测序
        2.3.1 文库构建及测序
        2.3.2 生物信息学分析及miRNA筛选
        2.3.3 qRT-PCR验证差异表达的miRNA
    2.4 miRNA靶基因的筛选与鉴定
        2.4.1 反转录获得cDNA
        2.4.2 引物设计
        2.4.3 靶基因的扩增与定量
3 结果与分析
    3.1 定时输精程序对早期妊娠母猪子宫发育的影响
    3.2 定时输精程序处理对子宫内膜sRNA转录的影响
        3.2.1 子宫内膜总RNA的提取与质量检测
        3.2.2 原始序列的纯化及sRNA序列长度分布
        3.2.3 sRNA的比对及分类注释
        3.2.4 miRNA的表达谱分析
        3.2.5 差异miRNA靶基因的GO功能分析
        3.2.6 差异miRNA靶基因的KEGG通路富集分析
        3.2.7 差异表达miRNA的验证
    3.3 ssc-miR-424的表达及其靶基因的筛选
        3.3.1 差异miRNA ssc-miR-424的表达
        3.3.2 差异表达miRNA靶基因的筛选
4 讨论
    4.1 定时输精程序对妊娠母猪子宫内膜的影响
    4.2 定时输精程序对妊娠母猪子宫内膜miRNA转录的影响
    4.3 ssc-miR-424的差异表达
    4.4 ssc-miR-424及其功能验证
5 结论
参考文献
在读期间发表的学术论文
作者简历
致谢
附件


【参考文献】：
期刊论文
[1]定时输精技术对规模化猪场经产母猪繁殖性能及效益的影响[J]. 黄正,周剑辉,李智.  今日养猪业. 2019(04)
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本文编号：3660943