牛分枝杆菌cfp10-esat6-cfp7融合基因的原核表达及抗原反应性分析

发布时间：2022-07-14 11:06

　　为了增强单个蛋白在牛结核病诊断中的敏感性和抗感染中的免疫原性,试验采用重叠延伸PCR将牛分枝杆菌cfp10基因与esat6基因融合,得到cfp10-esat6融合基因,再行重叠延伸PCR将cfp10-esat6融合基因与cfp7基因融合,得到融合基因cfp10-esat6-cfp7,并克隆至T-Vector pMD19中,构建重组质粒pMD-cfp10-esat6-cfp7。对pMD-cfp10-esat6-cfp7和pET-28a（+）进行BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切,将纯化的cfp10-esat6-cfp7连接到pET-28a（+）中,获得表达质粒pET-cfp10-esat6-cfp7,通过IPTG诱导,SDS-PAGE分析表达质粒在E.coli BL21（DE3）中的表达情况。对表达的融合蛋白进行镍柱纯化,通过Western-blot和间接ELISA分析其抗原反应性。结果表明:获得了融合基因cfp10-esat6-cfp7,表达了约36.3 ku的融合蛋白CFP10-ESAT6-CFP7。融合蛋白CFP10-ESAT6-CFP7与10份牛结核阳性血清反应的OD_492<... 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 载体、基因、菌株
    1.2 主要试剂
    1.3 引物的设计与合成
    1.4 融合基因cfp10-esat6-cfp7的获得与克隆
    1.5 表达质粒的构建及鉴定
    1.6 融合基因的诱导与表达分析
    1.7 融合蛋白的纯化与抗原反应性分析
2 结果与分析
    2.1 融合基因的PCR扩增产物
    2.2 克隆质粒的鉴定与测序
    2.3 表达质粒的鉴定与表达
    2.4 融合蛋白的抗原反应性分析
3 讨论



本文编号：3661010