鸡BRD2基因及其剪接体的克隆测序与亚细胞定位分析

发布时间：2022-08-11 16:46

　　【目的】克隆鸡含溴结构域蛋白2（BRD2）基因及其剪接体,并对其进行序列分析和亚细胞定位,为深入研究鸡BRD2基因及其剪接体在细胞转录调控中的作用机理打下基础。【方法】通过RT-PCR扩增鸡BRD2基因及其剪接体的编码区（CDS）序列,采用BioEdit、ProtParam、SOPMA、SWISS-MODEL、CDART等在线软件进行生物信息学分析;鸡BRD2基因及其剪接体经Xho I和Bam H I双酶切后,分别亚克隆至真核表达载体pEGFP-C1多克隆位点上构建重组真核表达载体,通过转染HEK-293T细胞进行亚细胞定位分析。【结果】鸡BRD2基因CDS序列全长2340 bp,编码779个氨基酸残基,分子量为85.66 k D,理论等电点（pI）为8.74,其编码蛋白二级结构主要由无规则卷曲（60.59%）和α-螺旋（28.50%）组成,含有3个明显的功能结构域（2个BD结构域和1个ET结构域）。与鸡BRD2基因相比,其剪接体BRD2-X1、BRD2-X2和BRD2-X3的CDS序列长分别为2301、2283和1983 bp,编码766、760和660个氨基酸残基。以鸡BRD2氨基... 

【文章页数】：10 页

【文章目录】：
0 引言
1 材料与方法
    1.1 试验材料
    1.2 引物设计与合成
    1.3 鸡BRD2基因及其剪接体克隆与测序分析
    1.4 鸡BRD2基因及其剪接体重组真核表达载体构建
    1.5 细胞培养与转染
    1.6 鸡BRD2基因及其剪接体融合蛋白荧光观察
2 结果与分析
    2.1 鸡BRD2基因及其剪接体的克隆和重组真核表达载体构建
    2.2 鸡BRD2基因及其剪接体的生物信息学分析结果
        2.2.1鸡BRD2基因及其剪接体编码蛋白理化性质和功能结构域预测分析结果
        2.2.2 鸡BRD2蛋白结构预测和功能结构域保守性分析结果
        2.2.3 鸡BRD2蛋白的互作蛋白预测结果
        2.2.4 鸡BRD2基因核苷酸序列相似性和遗传进化分析结果
    2.3 鸡BRD2蛋白及其剪接体亚细胞定位分析结果
3 讨论
4 结论


【参考文献】：
期刊论文
[1]部分鸡种Brd2基因SNP和INDEL分析[J]. 吴允,毕榆林,张扬,郭晓敏,李志腾,万方,朱鹏飞,徐璐,常国斌,徐琪,陈国宏.  安徽农业大学学报. 2017(02)
[2]mRNA选择性剪接的分子机制[J]. 章国卫,宋怀东,陈竺.  遗传学报. 2004(01)

博士论文
[1]秦川牛脂肪沉积相关基因筛选及可变剪接对基因表达和细胞定位的影响研究[D]. 周扬.西北农林科技大学 2017

硕士论文
[1]BRD2核定位信号的核定位功能和细胞凋亡始动功能的初步研究[D]. 何佳瑾.中南大学 2007



本文编号：3675021