嗜水气单胞菌金属蛋白酶克隆表达及致病特性分析

发布时间：2022-09-17 10:39

　　嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）是一种革兰阴性杆菌,常分布于淡水、土壤、污水及水产动物中,是人、畜和水生动物共患的条件致病菌,能引起水产动物出血性败血症,严重危害着我国水产养殖业。 金属蛋白酶（metalloproteases）为一种细菌所分泌的胞外产物,属于一种蛋白酶类,其在一级结构上差异很大,但其活性中心较为保守、常含有金属离子（如锌、钴、镍等）,其中以锌离子居多,且是一种依靠金属离子催化肽键水解的蛋白水解酶。大多数有毒力的金属蛋白酶都是以Zn2+为催化中心的。 根据已发表的嗜水气单胞菌金属蛋白酶相关基因序列设计引物,以嗜水气单胞菌A. hydrophila J-1株基因组为模板,用PCR方法扩增得到了金属蛋白酶基因,并将其命名为ahMP.测序分析后发现,ahMP全长1281bp,包含一个可编码嗜水气单胞菌金属蛋白酶的完整ORF,大小为1266bp,可编码421个氨基酸,其中41个碱性氨基酸,51个酸性氨基酸,129个疏水性氨基酸,134个极性氨基酸。同源性分析后发现,与嗜水气单胞菌ATCC7966同源性为98%,与嗜水气单胞菌SSU和水族箱气单... 

【文章页数】：79 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
上篇 文献综述
    第一章 嗜水气单胞菌致病性研究进展
        1 病原学特征及流行特点
            1.1 形态学特点
            1.2 血清型
            1.3 培养特性
            1.4 鉴定方法
            1.5 流行病学
        2 毒力因子
            2.1 外毒素(exotoxins)
            2.2 胞外蛋白酶(extracellular protease)
            2.3 S蛋白(S-layer protein)
            2.4 菌毛(fimbriae)
            2.5 外膜蛋白(out-membrane proteins OMPs)
            2.6 脂多糖(liopopolysaccharide LPS)
        3 嗜水气单胞菌感染的防控
            3.1 免疫预防
            3.2 药物控制
            3.3 生态控制
        4 展望
        参考文献
    第二章 微生物金属蛋白酶的研究进展
        1 金属蛋白酶简介
            1.1 金属蛋白酶家族
            1.2 金属蛋白酶的合成、成熟及分泌
        2 金属蛋白酶的致病作用
            2.1 血管通透性的增强作用
            2.2 组织损伤
            2.3 细胞毒性
        3 微生物金属蛋白酶的应用
            3.1 食品业对金属蛋白酶的应用
            3.2 日用化工业对金属蛋白酶的应用
            3.3 医药业对金属蛋白酶的应用
            3.4 细菌致病研究对金属蛋白酶的应用
        4 总结与展望
        参考文献
下篇 试验研究
    第一章 嗜水气单胞菌ahMP基因的克隆及分布检测
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 实验材料
            1.2 实验方法
        2 结果
            2.1 ahMP基因扩增
            2.2 ahMP基因序列分析
            2.3 ahMP基因在气单胞菌中的分布检测
        3 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
    第二章 嗜水气单胞菌金属蛋白酶的表达纯化及其特性分析
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 实验材料
            1.2 实验方法
        2 结果
            2.1 目的基因ahMP的PCR扩增
            2.2 重组质粒pET32a-ahMP双酶切鉴定
            2.3 重组质粒的诱导表达
            2.4 重组蛋白的纯化鉴定
            2.5 酶活性检测
            2.6 重组蛋白的特性分析
        3 讨论
        参考文献
        Abstract
    第三章 嗜水气单胞菌中金属蛋白酶致病性分析
        摘要
        1 材料与方法
            1.1 实验材料
            1.2 实验方法
        2 结果
            2.1 多克隆抗体效价检测
            2.2 Western blot分析
            2.3 金属蛋白酶对EPC细胞的毒性
            2.4 小鼠病理组织学检查
            2.5 小鼠血常规检查
            2.6 鲫鱼人工感染试验
            2.7 感染鲫鱼病理组织学
        3 讨论
        参考文献
        ABSTRACT
全文总结
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]嗜水气单胞菌相关毒力基因的研究进展[J]. 李文艳,张伟伟,马秀娟,于建芳.  安徽农业科学. 2011(09)
[2]草鱼出血病混合感染的嗜水气单胞菌的分离、鉴定与理化特性[J]. 邓国成,江小燕,叶星,刘明智,许淑英,刘礼辉,白岳强,罗霞.  微生物学通报. 2009(08)
[3]嗜水气单胞菌气溶素毒力基因检测研究[J]. 朱建萍,叶展翔,朱烨,周琤.  中国热带医学. 2009(05)
[4]嗜水气单胞菌气溶素的纯化及其溶血特性分析[J]. 龚晖,林天龙,徐长安,张晓佩,杨先乐.  中国人兽共患病学报. 2009(05)
[5]三角帆蚌流行性疾病及药物筛选研究现状[J]. 郑艳红,葛熹凯,肖调义.  内陆水产. 2008(05)
[6]慢性重型肝炎并发嗜水气单胞菌败血症1例[J]. 游忠岚,陈嵩,王宇明.  第三军医大学学报. 2008(03)
[7]嗜水气单胞菌的研究进展[J]. 于学辉,王远微,汤承,岳华.  西南民族大学学报(自然科学版). 2007(03)
[8]鳗弧菌胞外金属蛋白酶的化学修饰研究[J]. 池政豪,陈吉祥,杨慧,刘斌,李筠.  生物技术通报. 2006(S1)
[9]嗜水气单胞菌临床分离株胞外毒力因子的检测[J]. 储卫华.  中国兽医杂志. 2006(01)
[10]鸭嗜水气单胞菌病的诊断及防治[J]. 岳华,汤承,刘群,于学辉,罗薇,杨晓农,龙虎,邓一科,刘内生,吴万友.  养禽与禽病防治. 2006(01)



本文编号：3679077