醋酸铅致大鼠肾小管上皮细胞氧化损伤及死亡受体途径介导细胞凋亡机理的研究

发布时间：2022-08-29 20:21

　　铅是一种对人体多个系统和器官具有毒性的重金属元素，在体内无任何生理功能，理想血液铅的浓度为0。由于铅在环境中可长期蓄积，不能降解，可以通过呼吸系统和消化器官进入人体，99%从肾脏代谢，肾脏是铅中毒的主要受损器官。 研究目的：本试验通过研究醋酸铅导致大鼠肾小管上皮细胞（NRK）的氧化损伤程度、细胞凋亡情况以及死亡受体通路在醋酸铅致NRK细胞凋亡过程中的作用，旨在探讨铅对动物肾脏毒性的作用机制，为防治铅中毒提供理论依据。 研究方法：体外培养NRK细胞，于细胞对数生长期加入0，2，10和50μM的醋酸铅作用24h后，采用MTT法检测细胞增殖率，黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶（SOD）活力，硫代巴比妥酸（TBA）法测定细胞中丙二醛（MDA）含量，比色法检测细胞中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性，ABTS快速法测定细胞中的总抗氧化能力（T-Aoc）。用Hoechst33258和Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡，Western blot检测FAS、FASL及Caspase-8的蛋白表达量，流式细胞仪检测Z-IETD-FMK对细胞凋亡的抑制作用。 结果：... 

【文章页数】：52 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
致谢
中文摘要
英文缩略词
第一章 文献综述
    1 研究背景
    2 铅简介
        2.1 铅的吸收
        2.2 铅在体内的分布
        2.3 铅的排泄
        2.4 铅污染途径及其污染状况
        2.5 铅的肾脏毒性及其损伤的病理变化
        2.6 铅的细胞毒性
    3 细胞凋亡
        3.1 细胞凋亡的特征
        3.2 细胞凋亡的途径
        3.3 三条通路间的相互关系
        3.4 Caspase 家族与细胞凋亡
    4 本研究的目的及意义
引言
第二章 醋酸铅对大鼠肾小管上皮细胞的毒性作用
    1 材料与方法
        1.1 主要试剂与仪器
        1.2 试验方法
            1.2.1 NRK 细胞的培养
            1.2.2 NRK 细胞的冻存和复苏
            1.2.3 细胞计数
            1.2.4 MTT 法检测醋酸铅对 NRK 细胞活性影响
            1.2.5 细胞染毒与分组
            1.2.6 SOD、MDA、GSH-Px 及 T-Aoc 的测定
            1.2.7 细胞凋亡的检测
        1.3 统计学分析
    2 结果与分析
        2.1 正常 NRK 细胞的形态
        2.2 醋酸铅对 NRK 细胞的细胞毒性
        2.3 细胞中 SOD、MDA、GSH-Px 及 T-Aoc 的检测
        2.4 Hoechst 33258 检测细胞凋亡
        2.5 Annexin V-FITC/PI 双染色法检测细胞凋亡
    3 讨论
    4 小结
第三章 醋酸铅诱导大鼠肾小管上皮细胞凋亡机理的研究
    1 材料与方法
        1.1 主要试剂与仪器
        1.2 试验方法
            1.2.1 FAS、FASL 和 Caspase-8 蛋白含量的检测（Western blot）
            1.2.2 总蛋白含量的测定
            1.2.3 蛋白样品的定量
            1.2.4 聚丙烯酰氨凝胶电泳（SDS-PAGE）
            1.2.5 转膜
            1.2.6 免疫杂交
            1.2.7 底物显示 ECL 发光法
            1.2.8 z-IETD-FMK 对细胞凋亡的抑制作用
    2 统计学分析
    3 结果与分析
        3.1 Western blot 检测 FAS、FASL 和 Caspase-8 的蛋白含量
        3.2 z-IETD-FMK 对细胞凋亡的影响
    4 讨论
参考文献
Abstract
作者简介


【参考文献】：
期刊论文
[1]大黄素通过内源性线粒体途径和外源性死亡受体途径诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡的研究[J]. 王耀先,郝慧南,陈秀玮,于辉,娄阁,吴效科.  中国中医药科技. 2013(01)
[2]乙酸铅诱发的HK-2细胞氧化应激与凋亡[J]. 雷义,金文达,朱茂祥,陈锋.  毒理学杂志. 2008(05)
[3]TFAR19蛋白协同米非司酮对前列腺癌PC-3M细胞凋亡的影响[J]. 于靖,赵雪飞,王继洲,姜颖,杜颜丹,林平,王淑娟,于晓光.  中国药理学通报. 2008(07)
[4]细胞凋亡信号传导通路的研究进展[J]. 杨绍杰,孟金萍,屈祎,刘云波.  中国比较医学杂志. 2007(05)
[5]我国铅污染现状、原因及对策[J]. 张正洁,李东红,许增贵.  环境保护科学. 2005(04)
[6]脱氧核糖核酸内切酶与细胞凋亡[J]. 许康,张苏明.  中国组织化学与细胞化学杂志. 2004(02)
[7]氟对软骨细胞与成骨细胞凋亡及H2O2、SOD、NO的影响[J]. 桂传枝,王长松,于燕妮,唐俊杰,刘家骝.  中国地方病学杂志. 2004(02)
[8]低铅染毒对大鼠脂质过氧化作用的影响[J]. 钟振伟,胡利人.  中国公共卫生. 2003(08)
[9]铅对大鼠肾脏SOD活性和MDA含量影响的研究[J]. 王俊虹,周蔚,王世鑫,张国辉,魏茂提.  武警医学院学报. 2002(03)
[10]实验性醋酸铅诱发鼠肾脏病理超微结构改变[J]. 龚建福,黄贤仪.  广东微量元素科学. 2001(09)



本文编号：3678951