质粒传播猪源致病性大肠杆菌耐药性和毒力研究

发布时间：2022-09-17 10:48

　　大肠杆菌病是威胁人类和动物健康的重要疾病之一。对于畜禽养殖业来说,动物种群中大肠杆菌病的流行和暴发往往带来巨大的经济损失,例如断乳仔猪水肿病、仔猪黄、白痢等,在养猪业中发病率和死亡率都较高。其中仔猪水肿病尤为严重,死亡率最高可达90%。现今,已有多种致病性大肠杆菌病原体可引起人畜共患病,加之菌株耐药现象的增多都给疾病的预防和治疗带来新的困难,多重耐药大肠杆菌在临床上更是多见,因此对致病性大肠杆菌毒力因子和耐药性的研究已成为现阶段科研研究的热点和难点。 本实验的目的是研究接合性质粒在致病性大肠杆菌传播耐药基因和毒力基因中的作用,以及由基因水平传播所引起菌株在毒力和耐药性方面的变化,52株实验用大肠杆菌分离于哈尔滨周边地区大肠杆菌病发病猪场,采用小白鼠体内攻毒试验确定菌株的致病性。本实验通过质粒接合试验分析致病大肠杆菌的耐药性、细菌毒力水平传播的可能性,并比较分析亲本菌株和接合子菌株的耐药性、毒力和毒力基因的变化。通过比较亲本菌株与接合子菌株对hep-2细胞的侵袭力评价菌株接合前后毒力的变化。依据CLSI （Clinical and Laboratory Standars insti... 

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 前言
    1.1 大肠杆菌概述
    1.2 致病性大肠杆菌
        1.2.1 致病性大肠杆菌分类
        1.2.2 致病性大肠杆菌的致病现状
        1.2.3 致病性大肠杆菌毒力因子
    1.3 水平基因转移概述
        1.3.1 基因水平传播的研究机制
        1.3.2 基因水平传播过程
        1.3.3 接合性质粒
    1.4 致病性大肠杆菌体外毒力检测概述
        1.4.1 HEp-2细胞
        1.4.2 HEp-2细胞用体外细菌侵袭试验研究
    1.5 选题的目的与意义
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 菌株
        2.1.2 试剂
        2.1.3 主要仪器与设备
        2.1.4 主要试剂的配制
    2.2 试验方法
        2.2.1 试验菌株的采集
        2.2.2 试验菌株的分离培养
        2.2.3 试验菌株的鉴定
        2.2.4 大肠杆菌致病性鉴定
        2.2.5 大肠杆菌的保存
        2.2.6 大肠杆菌体外药物敏感性检验
        2.2.7 大肠杆菌毒力基因检测
        2.2.8 大肠杆菌质粒接合实验
        2.2.9 接合子菌株耐药性及毒力基因检测
        2.2.10 大肠杆菌对HEp-2细胞毒力试验
3 结果
    3.1 大肠杆菌分离鉴定结果
        3.1.1 分离结果
        3.1.2 生化鉴定结果
        3.1.3 试验菌株镜检结果
        3.1.4 大肠杆菌对小白鼠的致病性
    3.2 大肠杆菌的耐药性
    3.3 52 株大肠杆菌毒力基因的检测
        3.3.1 大肠杆菌各毒力因子检出率
        3.3.2 大肠杆菌毒力基因凝胶电泳图
    3.4 接合实验结果
        3.4.1 亲本菌株和接合子菌株耐药表型比较结果
        3.4.2 阿米卡星对大肠杆菌MIC值和MBC值
    3.5 接合子菌株毒力基因检测结果
        3.5.1 毒力因子PCR结果统计
    3.6 大肠杆菌毒力试验结果
        3.6.1 阿米卡星对HEp-2细胞的最大药物安全浓度
        3.6.2 大肠杆菌对HEp-2细胞毒力测定结果
    3.7 透射电镜实验结果
        3.7.1 正常HEp-2细胞图片
        3.7.2 大肠杆菌ATCC25922侵袭HEp-2细胞图片
        3.7.3 毒力改变菌株侵袭HEp-2细胞图片
4 讨论
    4.1 大肠杆菌药敏试验结果分析
    4.2 毒力基因水平传播分析
    4.3 致病性大肠杆菌毒力基因分析
        4.3.1 毒力基因之间关系分析
        4.3.2 大肠杆菌耐药性与毒力基因关系分析
    4.4 大肠杆菌侵袭HEp-2细胞结果分析
        4.4.1 菌株毒力改变分析
        4.4.2 毒力岛与大肠杆菌致病性分析
5 结论
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的学术论文


【参考文献】：
期刊论文
[1]尿道致病性大肠杆菌I型菌毛的研究进展[J]. 杨东靖,葛新,李力.  中国慢性病预防与控制. 2011(01)
[2]猪肠外致病性大肠杆菌的分离鉴定和药敏试验[J]. 徐引弟,王治方,朱文豪,梁跃,郭成留.  河南农业科学. 2011(01)
[3]大肠杆菌的基本知识概述[J]. 肖安庆.  中学生物学. 2010(11)
[4]猪源致病性大肠杆菌的血清型、毒力基因及抗菌药耐药性的调查[J]. 王秀梅,蒋红霞,廖晓萍,张万江,朱恒乾,张悦,刘雅红.  中国农业科学. 2010(19)
[5]大肠埃希菌毒力因子检测及其与耐药相关性研究[J]. 徐春泉,周翠,徐琦煜,费静娴,周武,李超,周明明,周铁丽.  疾病监测. 2010(07)
[6]猪源大肠杆菌多重耐药性的检测与分析[J]. 薛原,张秀英,陈建飞,王贵霞,张彦龙.  中国兽医杂志. 2010(03)
[7]病原菌毒力岛研究进展[J]. 王长军,唐家琪.  生物技术通讯. 2008(02)
[8]携带HPI毒力岛的大肠杆菌的毒力基因分析[J]. 卢珊,任志鸿,陈凯,叶长芸,徐建国.  中国人兽共患病学报. 2007(07)
[9]不同毒力基因型大肠杆菌的毒力测定[J]. 成大荣,黄维嘉,张迎春,张科军,徐建生.  动物医学进展. 2005(12)
[10]食品中大肠埃希氏菌、沙门氏菌整合子的耐药性水平传递研究[J]. 刘渠,刘衡川,白松涛,李灶平,张茂棠,林斯星,古锦泰.  现代预防医学. 2004(05)

硕士论文
[1]产志贺毒素大肠杆菌毒素基因敲除及毒力测定的研究[D]. 潘虹.甘肃农业大学 2012
[2]禽致病性大肠杆菌携带耶尔森菌强毒力岛的检测及其与致病性的关系[D]. 许丽.安徽农业大学 2010



本文编号：3679087