猪附红细胞体重组酶介导等温扩增技术（RAA）荧光检测方法的建立

发布时间：2022-12-18 01:31

　　为建立一种准确、快速的猪附红细胞体检测方法,根据猪附红细胞体α-烯醇化酶基因保守序列设计特异性引物和探针,经过筛选优化反应条件,建立了重组酶介导的等温扩增（RAA）荧光检测方法。结果显示,建立的方法在39℃恒温条件下20 min内即可特异性地检出猪附红细胞体,与猪肺炎支原体、猪链球菌、猪大肠杆菌、猪瘟病毒、猪圆环病毒2型、非洲猪瘟病毒、健康猪血液无交叉反应,方法的最低检出限为1 copy/μL。用该方法对15份临床样本进行检测,结果阳性率为60%,与荧光定量PCR方法检测结果一致。本研究建立的猪附红细胞体荧光RAA检测方法具有较好的敏感性和特异性,操作简便可应用于猪附红细胞体病的临床快速检测。 

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 样本来源
        1.1.2 主要仪器和试剂
    1.2 方法
        1.2.1 猪附红细胞体阳性样本确认
        1.2.2 猪附红细胞体DNA提取
        1.2.3 RAA引物、探针设计与筛选
        1.2.4 RAA扩增体系及反应条件优化
        1.2.5 敏感性试验
        1.2.6 特异性试验
        1.2.7 重复性试验
        1.2.8 临床样本检测
2 结果
    2.1 阳性样本确认
    2.2 引物探针筛选
    2.3 反应条件及扩增体系优化
    2.4 敏感性试验
    2.5 特异性试验
    2.6 重复性试验
    2.7 临床样品检测
3 讨论


【参考文献】：
期刊论文
[1]猪附红细胞体病防治病例[J]. 王学利.  中国畜禽种业. 2018(11)
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[4]一例猪瘟与附红细胞体混感的诊治[J]. 李香庆.  中国动物保健. 2016(08)
[5]浅谈猪附红体病的防治[J]. 王阜生,包伟.  中国畜禽种业. 2013(06)
[6]体外核酸快速扩增技术的发展和不断创新[J]. 吕蓓,程海荣,严庆丰,黄震巨,李轶女,罗达,沈桂芳,张志芳,邓子新,林敏,程奇.  中国生物工程杂志. 2011(03)
[7]猪附红细胞体单管巢式PCR诊断方法的建立及应用[J]. 郑秀红,贾立军,邢莹,张守发.  中国兽医学报. 2011(02)
[8]规模化猪场猪附红细胞体病综合防治措施[J]. 高正,刘凤卿,薛荣发,米耀荣,白艳艳,张斌,张曦,刘健鹏.  畜牧兽医杂志. 2010(02)
[9]一起猪附红细胞体与链球菌病混合感染的诊治[J]. 王晓燕.  青海畜牧兽医杂志. 2010(01)
[10]猪附红细胞体对不同宿主红细胞的体外感染试验[J]. 吕舟,贾立军,曲平,张守发.  畜牧与兽医. 2008(09)

硕士论文
[1]猪附红细胞体PCR-ELISA检测方法的建立及应用研究[D]. 倪婷婷.延边大学 2018



本文编号：3721055