PRRSV流行毒株NSP2、ORF5遗传变异分析及其弱毒疫苗免疫效果评价

发布时间：2022-12-25 17:52

　　猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRS virus, PRRSV）引起的一种高度接触性传染病,2006～2007年,中国南部暴发以死亡率高、传播速度快为特征的高致病性PRRSV （HP-PRRSV）,给广大养殖户带来巨大经济冲击。 为了解我国PRRSV流行情况和不同免疫背景下发病猪群相关毒株遗传进化和变异特点,本研究对我国不同地点和时间发病猪的病料进行PRRSV流行病学检测、病毒分离。 目前,疫苗免疫是预防和控制]3P-PRRS的重要措施,虽然商品化弱毒疫苗较灭活苗可以更快诱发机体的特异性免疫,但在临床使用中弱毒疫苗的免疫时间、免疫剂量及免疫次数等方面经常出现使用混乱的现象,而且对其免疫效果仍缺乏较完善的评价体系,因此本研究对市场常用的两种商品化PRRS活疫苗JXA1-R和CH-1R进行了免疫效果评价。研究内容如下： 1. PRRSV流行毒株的分离及遗传变异分析 2012-2013年,本研究在湖北、湖南、广东、河南等地采集临床样品720份,P... 

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
缩略语表（Abbreviation)
1 文献综述
    1.1 PRRSV概况
    1.2 PRRSV病原学特性
        1.2.1 PRRSV分类
        1.2.2 抗原性
        1.2.3 临床特性
        1.2.4 生物学特性
    1.3 分子生物学研究进展
        1.3.1 PRRSV基因组结构
        1.3.2 PRRSV非结构蛋白质
        1.3.3 PRRSV结构蛋白质
        1.3.4 PRRSV基因遗传变异和抗原性变异
        1.3.5 PRRSV毒力变异
    1.4 PRRSV的免疫学研究进展
        1.4.1 体液免疫
        1.4.2 细胞免疫
    1.5 PRRS诊断方法研究进展
        1.5.1 血清学诊断方法
            1.5.1.1 间接免疫荧光实验(IFA)
            1.5.1.2 免疫过氧化物酶单层试验(IPMA)
            1.5.1.3 血清中和试验(SNT)
            1.5.1.4 酶联免疫吸附试验(ELISA)
        1.5.2 分子生物学诊断方法
            1.5.2.1 PRRSV分离鉴定
            1.5.2.2 PRRSV核酸检测
    1.6 PRRS疫苗研究进展
        1.6.1 PRRS常规疫苗
            1.6.1.1 灭活苗
            1.6.1.2 弱毒活疫苗
        1.6.2 PRRS新型疫苗
            1.6.2.1 核酸疫苗
            1.6.2.2 亚单位疫苗
            1.6.2.3 活病毒载体疫苗
2 研究目的和意义
3 材料与方法
    3.1 试验材料
        3.1.1 毒株和细胞
        3.1.2 病料、疫苗和实验动物
        3.1.3 工具酶和主要试剂
        3.1.4 相关试剂及其配制
        3.1.5 引物设计与合成
        3.1.6 分子生物学软件
    3.2 实验方法
        3.2.1 病料采集与处理
        3.2.2 血清或组织样品总RNA的提取
        3.2.3 两步法RT-PCR
        3.2.4 PCR产物或酶切产物的回收与纯化
        3.2.5 回收后DNA片段与质粒载体的连接反应
        3.2.6 连接产物的转化
        3.2.7 质粒的小量提取
        3.2.8 重组质粒的酶切鉴定
        3.2.9 测序
        3.2.10 动物实验
        3.2.11 PRRSV W-UH3的增殖
        3.2.12 半数细胞培养物感染量(TCID_(50))的测定
        3.2.13 微量中和试验(固定病毒-稀释血清法)
        3.2.14 IFN-γ的检测
        3.2.15 PRRSV抗体检测
        3.2.16 绝对荧光定量检测病毒血症及病毒载量
        3.2.17 病理切片制作
        3.2.18 统计学方法
4 结果与分析
    4.1 PRRSV遗传变异分析
        4.1.1 PRRSV流行毒株NSP2、ORF5基因的扩增及重组质粒的鉴定
        4.1.2 HZ-31的检测与分离
        4.1.3 流行毒株NSP2序列分析
        4.1.4 流行毒株ORF5序列分析
    4.2 PRRSV HZ-31序列分析
        4.2.1 PRRSV HZ-31全基因组分段RT-PCR扩增结果
        4.2.2 PRRSV HZ-31全基因组序列分析
        4.2.3 PRRSV HZ-31序列分析
        4.2.4 HZ-31株毒力相关氨基酸的变异分析
    4.3 PRRS弱毒疫苗的免疫效果评价
        4.3.1 临床症状观察
        4.3.2 血清中PRRSV ELISA抗体水平
        4.3.3 血清中PRRSV中和抗体水平
        4.3.4 血清中IFN-γ水平
        4.3.5 病毒血症
        4.3.6 鼻拭子、粪拭子排毒情况
        4.3.7 剖检、病理观察
        4.3.8 组织病毒载量
5 讨论与结论
    5.1 讨论
        5.1.1 NSP2蛋白的变异分析
        5.1.2 ORF5蛋白的变异分析
        5.1.3 HZ-31全基因组序列分析
        5.1.4 PRRS活疫苗免疫效果评价
    5.2 结论
参考文献
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]荧光显色在环介导等温扩增（LAMP）检测猪繁殖与呼吸综合征病毒的应用[J]. 张跃伟,李旭妮,郭盼盼,付萍,李佳禾,黄书林,蒋菲,吴文学.  农业生物技术学报. 2010(03)
[2]基于多重PCR的寡核苷酸基因芯片检测猪瘟病毒,猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒及猪圆环病毒1型和2型[J]. 姜永厚,商晗武,徐辉,朱良俊,丁先锋,陈伟杰,赵灵燕,方立.  中国预防兽医学报. 2010(03)
[3]安徽省猪蓝耳病疫苗临床免疫效果调查[J]. 朱良强,王非,占松鹤,刘华,王军,何长生,江定丰,郑举.  安徽农业科学. 2009(27)
[4]猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒基因芯片检测技术的建立与优化[J]. 杨林,潘全会,曹巧玲,张桂红,陈苏红,廖明.  中国动物检疫. 2007(05)
[5]PRRSV-IPMA抗体检测试剂盒的研制及其应用[J]. 谭斌,刘长明,危艳武,张超范,刘永刚,冉多良.  中国兽医科学. 2006(11)
[6]猪繁殖-呼吸综合征活疫苗对仔猪的安全性试验[J]. 王洪峰,蔡雪辉,刘永刚,李艳华,柴文君,温永俊,尹训南,褚桂芳.  中国预防兽医学报. 2006(03)
[7]从疑似PRRS流产胎儿分离PRRSV的研究[J]. 郭宝清,陈章水,刘文兴,崔益洙.  中国畜禽传染病. 1996(02)

博士论文
[1]猪繁殖与呼吸综合征病毒新型基因工程疫苗研究[D]. 江云波.华中农业大学 2007



本文编号：3727079