MiR-1和miR-133在山羊骨骼肌组织和细胞中的表达规律及功能研究

发布时间：2023-02-07 08:39

　　MicroRNAs (miRNAs)是一组内源性非编码的小RNA分子,由19-22个核苷酸组成,在病毒、动物和植物等生物中广泛存在。它可以通过与靶基因mRNA的3’端非编码区(3’UTR)碱基完全或不完全互补配对,使基因mRNA直接降解或者抑制其翻译,导致基因在转录后水平发生沉默,从而影响基因的表达,进而对细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡、肿瘤的发生以及脂类代谢等过程进行调控。目前,关于miRNAs的研究仍处于初步阶段,国内外的研究主要集中于模式生物miRNAs的发现,以及其中与生长发育、疾病发生相关的miRNAs的功能研究,而对于重要的家畜—山羊的miRNAs的研究则相对较少。本试验的目的在于通过分析miR-1和miR-133及其靶基因(HDAC4和SRF)在山羊骨骼肌的发育过程和骨骼肌卫星细胞中的时空表达规律以及功能研究,以了解其在山羊骨骼肌发育过程中的重要作用。1.山羊miR-1和miR-133及其靶基因(HDAC4和SRF)时空表达规律研究。在影响山羊生长发育的众多microRNAs中,选取了两个重要的microRNAs (miR-1和miR-133)作为研究对象,并利用生物信息学...

【文章页数】：81 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 文献综述
    1.1 研究背景
    1.2 NcRNA
        1.2.1 NcRNA的种类
        1.2.2 NcRNA的功能
        1.2.3 NcRNA小家族成员——miRNA与siRNA
    1.3 MicroRNA的来源及其作用机制
    1.4 MicroRNA的特征
        1.4.1 MicroRNAs的存在形式
        1.4.2 MicroRNA的生物学特性
    1.5 MiRNA、miRNA-1和miRNA-133的功能及其研究进展
        1.5.1 MiRNAs的功能
        1.5.2 MiRNA-1和miRNA-133对动物发育的调控作用
        1.5.3 MiRNA-1和miRNA-133对肌细胞增殖与分化的调控
        1.5.4 MiRNA-1和miRNA-133对动物疾病发生的影响
    1.6 MicroRNA基因的鉴定
        1.6.1 构建富集miRNA的cDNA文库法
        1.6.2 生物信息学分析法
    1.7 MiRNA靶基因的预测与鉴定
        1.7.1 MiRNA靶基因的预测
        1.7.2 MiRNA靶基因的鉴定
    1.8 MiRNA的研究展望
第二章 山羊miR-1和miR-133及其靶基因(HDAC4和SRF)时空表达规律研究
    引言
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验对象
        2.1.2 主要仪器与设备
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 相关溶液配置
    2.2 实验方法
        2.2.1 MiRNA-1和miRNA-133引物设计与合成
        2.2.2 总RNA提取和cDNA合成
        2.2.3 MiR-1和miR-133靶基因的预测
        2.2.4 3'RACE法扩增靶基因的3'UTR
        2.2.5 MiR-1和miR-133及其靶基因(HDAC4和SRF)荧光定量检测
    2.3 结果与分析
        2.3.1 总RNA的抽提与检测
        2.3.2 MiR-1、miR-133以及靶基因(HDAC4和SRF)基因的获得
        2.3.3 3'RACE方法扩增HDAC4 3'UTR和SRF 3'UTR
        2.3.4 3'RACE方法扩增HDAC4 3'UTR和SRF 3'UTR基因测序图
        2.3.5 荧光定量的结果
    2.4 讨论
        2.4.1 RNA纯度的测定与检验
        2.4.2 测序方式的选择
        2.4.3 MiR-1和miR-133的靶基因预测
        2.4.4 3'RACE方法扩增靶基因HDAC4 3'UTR和SRF 3'UTR以及测序分析
        2.4.5 山羊miR-1和miR-133以及靶基因(HDAC4和SRF)定量方法的建立
        2.4.6 关于miRNA、miR-1和miR-133及其靶基因的功能
        2.4.7 山羊生长发育与miR-1和miR-133可能的关系
    2.5 小结
第三章 MiR-1和miR-133及其靶基因(HDAC4和SRF)在山羊骨骼肌卫星细胞中的表达规律
    引言
    3.1 材料和方法
        3.1.1 主要试剂
        3.1.2 主要仪器
        3.1.3 常用溶液的配制
        3.1.4 细胞培养
        3.1.5 细胞中总RNA的提取
        3.1.6 cDNA合成
        3.1.7 MiR-1和miR-133及其靶基因(HDAC4和SRF)在山羊骨骼肌卫星细胞中的表达规律
        3.1.8 数据分析
    3.2 结果
        3.2.1 细胞总RNA提取结果
        3.2.2 MiR-1和miR-133及其靶基因(HDAC4和SRF)在山羊骨骼肌卫星细胞中的表达规律
    3.3 讨论
    3.4 小结
第四章 MiR-1和miR-133对靶基因(HDAC4和SRF)的调控研究
    引言
    4.1 材料和方法
        4.1.1 主要试剂
        4.1.2 主要仪器
        4.1.3 常用溶液的配制
        4.1.4 Real Time PCR和Western blotting对miR-1和miR-133靶基因表达的验证
            4.1.4.1 MiRNA mimics转染条件的摸索
    4.2 结果
        4.2.1 细胞总RNA提取结果
        4.2.2 MiRNA mimics转染条件的摸索结果
        4.2.3 MiR-1和miR-133 mimics瞬时转染结果
        4.2.4 MiR-1和miR-133 mimics瞬转后HDAC4和SRF mRNA表达的检测
        4.2.5 miR-1和miR-133 mimics转染后HDAC4和SRF蛋白的表达的检测
    4.3 讨论
    4.4 小结
结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3736765