蛋鸡禽白血病J亚群流行病学调查及致病性研究

发布时间：2023-02-20 15:26

　　J亚群禽白血病病毒是由（Subgroup J Avian Leukosis Virus）是1988年英国科学家Payne首先在肉鸡中发现的，主要引起以髓细胞瘤和其他细胞恶性肿瘤为特征的传染性肿瘤性疾病。我国于1999年首次从肉鸡中发现该病毒，2004年从蛋鸡中发现该病毒，之后陆续从地方品种鸡中发现。ALV-J自发现以来，宿主范围不断扩大，感染鸡的发病日龄逐渐提前，致死率不断升高，诱导的肿瘤型越来越多，病毒重组也时有发生。为了了解山东省地区ALV-J在蛋鸡群的流行状况、致病特点及相关宿主因素，本研究对山东省范围内的父母代蛋种鸡场进行ALV-J的血清和分子流行病学调查、病毒在自然感染蛋鸡体内的致瘤性观察及宿主受体、原癌基因和内源性ALV基因表达检测，初步得到的结果如下： 从山东省选取了22家父母代蛋种鸡场和4家商品代蛋鸡场，共采集活体样本83只，血清2740份实际检测数为2350份；通过ELISA技术检测血清抗体发现，蛋鸡群中ALV-J抗体平均阳性率在8.3%，鸡群感染阳性率为65%（17/26），在这些ALV-J抗体阳性的蛋鸡群中，海兰褐等进口鸡群抗体平均阳性率为3%，相对较低；中国地方...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 ALV-J 病原学
        1.1.1 ALV 亚群分类
        1.1.2 ALV-J 的病毒及基因组结构
    1.2 ALV-J 的流行病学研究概括
    1.3 ALV-J 的致病性
    1.4 ALV-J 的诊断和防控
        1.4.1 ALV-J 的诊断
        1.4.2 ALV-J 的防控
    1.5 ALV-J 受体-CHNHE1 蛋白
    1.6 原癌基因 C-MYC 和 C-MYB
    1.7 抑癌基因 P53
    1.8 本研究的目的和意义
2 材料与方法
    2.1 ALV-J 血清流行病学及分子流行病学调查
        2.1.1 主要试剂及仪器
        2.1.2 细胞、毒株、菌株
        2.1.3 样品采集
        2.1.4 ALV-J 抗体检测
        2.1.5 REV 抗体检测
        2.1.6 ALV-J 的分离和鉴定
            2.1.6.1 病毒培养
            2.1.6.2 ELISA 检测 ALV 抗原 P27
            2.1.6.3 提取前病毒基因组 DNA
            2.1.6.4 ALV-J、REV 和 MLV 的 PCR 检测
            2.1.6.5 gp85、gp37、3’UTR 和 3’LTR 基因分离及克隆测序
            2.1.6.6 gp85、gp37、3’UTR 和 3’LTR 基因序列比较分析
    2.2 ALV-J 在自然感染蛋鸡中致瘤普观察
        2.2.1 主要试剂及仪器
        2.2.2 病料来源
        2.2.3 组织病理学观察
        2.2.4 血液学观察
            2.2.4.1 全血分析
            2.2.4.2 血涂片、骨髓涂片观察
    2.3 ALV-J 感染机体内病毒负载量、CHNHE1 蛋白、C-MYC、P53 及 EAV-0、E51 表达量的检测
        2.3.1 主要试剂及仪器
        2.3.2 材料来源
        2.3.3 荧光定量 PCR 引物的设计与合成
        2.3.4 组织 RNA 的提取和 cDNA 的合成
        2.3.5 常规 PCR 检测
        2.3.6 ALV-J 自然感染蛋鸡体内 ALV-J 负载量、chNHE1 蛋白、c-myc、p53 和 EAV-0、E51表达量检测
        2.3.7 ALV-J 人工感染鸡体内 ALV-J 负载量、chNHE1 蛋白表达量检测
            2.3.7.1 人工接种 SPF 鸡胚及雏鸡排毒检测
            2.3.7.2 ALV-J 负载、chNHE1 蛋白表达量检测
3 结果与分析
    3.1 ALV-J 血清流行病学和分子流行病学的调查
        3.1.1 样品采集
        3.1.2 血清学检测
        3.1.3 ALV-J 的分离与鉴定
            3.1.3.1 P27 抗原及 PCR 检测
            3.1.3.2 env、3’UTR 和 3’LTR 基因的分离
            3.1.3.3 env、3’UTR 和 3’LTR 基因碱基序列分析
    3.2 ALV-J 在自然感染蛋鸡中的致瘤谱观察
        3.2.1 组织病理学观察
        3.2.2 全血分析
        3.2.3 血涂片观察
    3.3 ALV-J 感染鸡体内病毒负载量、CHNHE1 蛋白、C-MYC、P53 及 EAV-0、E51 表达量的检测
        3.3.1 常规 PCR 检测
        3.3.2 ALV-J 自然感染蛋鸡体内 ALV-J 负载量、chNHE1 蛋白、c-myc、p53 和 EAV-0、E51表达量检测
            3.3.2.1 引物溶解曲线、扩增曲线分析
            3.3.2.2 ALV-J 自然感染蛋鸡肾脏病毒负载的检测
            3.3.2.3 ALV-J 受体-chNHE1 蛋白表达量的检测
            3.3.2.4 ALV-J 人工感染蛋鸡体内 ALV-J 负载量、chNHE1 蛋白表达量检测
            3.3.2.5 原癌基因 c-myc 表达量的检测
            3.3.2.6 抑癌基因 P53 表大量的检测
            3.3.2.7 内源性病毒 EAV-0 表大量的检测
            3.3.2.8 内源性病毒 EAV-E51 表达量检测
4 讨论
    4.1 ALV-J 血清流行病学与分子流行病学的调查
    4.2 ALV-J 自然感染鸡体内致瘤普观察
    4.3 ALV-J 感染鸡体内 ALV-J 负载量，CHNHE1 蛋白、C-MYC、P53 及 EAV-0、E51 表达量的测定
5 全文结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表、录用（或已投稿）论文
致谢



本文编号：3746946