GM-CSF-Ag85B-Rv3872-CFP10-ESAT6重组卡介苗的构建与鉴定

发布时间：2023-02-20 21:38

　　结核病是由结核杆菌复合群引起的一种人畜共患病,具有较高的感染率和死亡数。该病不仅严重影响人类的身体健康,还对畜牧业造成惨重的经济损失。据统计,每年全球约有三分之一的人口潜伏感染结核,约有940万新发结核病例,170万人死于结核感染。同时,每年有5千万牛感染结核,导致30亿的损失。在人结核防治上,主要采取新生婴儿BCG(Mycobacterium bovis bacillus Calmette-Guerin)免疫和结核病人的抗生素治疗。BCG免疫只对儿童有保护效果,且不同地区免疫保护效果差异很大。结核病治疗病程长,需6个月以上；药物副作用大；且由于多耐药药和泛耐药菌株的出现,治疗效果越来越差。因此,急需开发新型高效疫苗,增加对儿童的保护力,同时对成年有效。由于结核病的人兽共患特征,动物结核的防控措施是“检疫-扑杀”,不做免疫。但“检疫-扑杀”政策具有很多缺陷,难以实质性实施。首先,检疫-扑杀的成本过高,发展中国家难以承受；其次,动物结核病主要由牛分枝杆菌引起,该菌宿主范围极广,不同宿主间的传播导致“检疫-扑杀”政策效果差；同时,野生动物难以进行检疫和扑杀。因此,动物结核病的防控也急需要有...

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【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
缩略语表(Abbreviation)
1 前言
    1.1 问题的来由
    1.2 文献综述
        1.2.1 结核病研究进展
        1.2.2 结核疫苗研究进展
        1.2.3 结核菌特异保护性抗原的研究进展
        1.2.4 分子佐剂的研究进展
    1.3 目的意义
2 材料方法
    2.1 材料
        2.1.1 菌种
        2.1.2 多抗及蛋白
        2.1.3 质粒
        2.1.4 引物
        2.1.5 试剂及其配方
        2.1.6 培养基及血清
        2.1.7 实验动物
        2.1.8 仪器
    2.2 方法
        2.2.1 重组质粒的构建
        2.2.2 重组质粒pET32a-GARCE、pET32a-GARCE的表达
        2.2.3 重组BCG的构建
        2.2.4 重组BCG外源基因的表达与鉴定
        2.2.5 重组BCG生物特性鉴定
        2.2.6 动物实验
3 结果与分析
    3.1 重组质粒的构建
        3.1.1 PCR扩增GM-CSF，Ag85B,Rv3872,CFP10/ESAT6基因
        3.1.2 利用SOE串联扩增各目的基因
        3.1.3 重组质粒的构建与鉴定
    3.2 编码目的基因重组质粒的表达
        3.2.1 大肠杆菌的表达
        3.2.2 重组BCG的表达
    3.3 重组BCG的生物学特性
        3.3.1 重组BCG的菌落形态
        3.3.2 重组BCG的抗酸染色结果
        3.3.3 重组BCG的生长曲线
        3.3.4 重组BCG的稳定性
    3.4 动物实验
        3.4.1 体液免疫水平的评价
        3.4.2 细胞免疫水平的评价
        3.4.3 临床症状
        3.4.4 病理切片
4 讨论
    4.1 融合蛋白的克隆表达及特性
    4.2 重组BCG的免疫学评价
    4.3 结论
参考文献
致谢



本文编号：3747360