H5和H9亚型禽流感病毒遗传特性分析及细胞培养候选疫苗株的拯救
发布时间：2023-03-05 11:21
禽流感是由A型流感病毒引起的一种禽类呼吸道疾病综合征，自从1878年首次报道以来，在世界范围内广泛存在，无论是高致病性禽流感病毒还是低致病性禽流感病毒都给我国养殖业和公共卫生事业带来了重大的威胁。 2011年从我国吉林、山东和福建三个省的98份野鸭粪便中分离鉴定出7株H5N1亚型禽流感病毒(Avian influenza virus, AIV)，HA基因的进化分析表明分布于以上三个省份的5株病毒属于2.3.2.1分支，来自山东省的2株病毒分别属于2.3.4和7.2分支，表明不同分支的AIV在我国局部地区呈现共同流行的趋势。7株病毒的HA基因核苷酸同源率在88.2%99.6%之间，与各自分支代表株的核苷酸同源率在95%以上，与国内目前流行毒株也具有较高的同源性，其中，分离毒株A/wild duck/Shandong/1/2011, A/wild duck/Shandong/628/2011和A/wild duck/Jilin/ZF/2011的内部基因来自不同的分支，属于重组病毒。SPF鸡和鸭的人工感染实验结果表明3个分离毒株对SPF鸡和鸭均具有致病性，2.3.2.1...
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言
1.1 流感病毒的分子生物学
1.1.1 流感病毒的结构
1.1.2 流感病毒的编码蛋白
1.1.3 流感病毒的复制
1.1.4 流感病毒的遗传和变异
1.2 禽流感的流行现状
1.2.1 H5N1 亚型禽流感
1.2.2 H9N2 亚型禽流感
1.3 禽流感疫苗的研究进展
1.3.1 全病毒灭活疫苗
1.3.2 重组活载体疫苗
1.3.3 DNA 疫苗
1.3.4 亚单位疫苗
1.4 流感病毒反向遗传学操作技术的发展历史
1.4.1 借助辅助病毒拯救流感病毒
1.4.2 借助质粒系统拯救流感病毒
1.5 反向遗传学操作技术在流感病毒研究中的应用
1.5.1 反向遗传学操作技术与流感病毒生物学研究
1.5.2 反向遗传学操作技术与流感疫苗研究
1.5.3 反向遗传学操作技术与流感病毒载体研究
1.6 本研究的目的和意义
第二章 H5N1 亚型 AIV 遗传特性分析
2.1 材料与方法
2.1.1 病毒株
2.1.2 实验动物
2.1.3 主要试剂和仪器
2.1.4 病毒基因组 RNA 的提取及 cDNA 的合成
2.1.5 引物设计与合成
2.1.6 目的基因的 PCR 扩增
2.1.7 序列测定与分析比较
2.1.8 病毒的致病性研究
2.2 结果
2.2.1 病毒基因组序列遗传特性分析
2.2.2 病毒的致病性分析
2.3 讨论
第三章 H9N2 亚型 AIV HA 基因的遗传特性分析
3.1 材料与方法
3.1.1 病毒株
3.1.2 实验试剂和方法
3.1.3 H9N2 亚型流感病毒 HA 基因的序列分析
3.1.4 动物感染实验
3.2 结果
3.2.1 PCR 扩增结果
3.2.2 H9N2 亚型 AIV HA 基因遗传进化分析
3.2.3 HA 基因核苷酸及氨基酸的同源性分析
3.2.4 HA 基因关键位点的氨基酸序列分析
3.2.5 动物感染实验结果
3.3 讨论
第四章 H9N2 亚型 AIV 细胞培养候选疫苗株的拯救
4.1 材料与方法
4.1.1 病毒株与质粒
4.1.2 细胞及载体
4.1.3 实验动物
4.1.4 主要试剂和仪器
4.1.5 EID50和 TCID50的测定
4.1.6 pHW2000 双向转录载体的工作原理
4.1.7 rSH11 拯救的技术路线
4.1.8 rSH11 毒株的拯救
4.1.9 rSH11 的鉴定
4.1.10 动物免疫保护实验
4.1.11 HA 和 NA 基因替换重组流感病毒的拯救
4.2 结果
4.2.1 H9N2 亚型 AIV 的生长特性
4.2.2 重组质粒的 PCR 鉴定
4.2.3 聚合酶基因和核蛋白基因重组质粒表达活性的荧光鉴定
4.2.4 重组病毒的血凝活性检测
4.2.5 rSH11 的拯救
4.2.6 rSH11 的鉴定
4.2.7 rSH11 的免疫原性研究结果
4.2.8 HA 和 NA 基因替换重组流感病毒的拯救
4.3 讨论
第五章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简历
本文编号：3756099
【文章页数】：74 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 引言
1.1 流感病毒的分子生物学
1.1.1 流感病毒的结构
1.1.2 流感病毒的编码蛋白
1.1.3 流感病毒的复制
1.1.4 流感病毒的遗传和变异
1.2 禽流感的流行现状
1.2.1 H5N1 亚型禽流感
1.2.2 H9N2 亚型禽流感
1.3 禽流感疫苗的研究进展
1.3.1 全病毒灭活疫苗
1.3.2 重组活载体疫苗
1.3.3 DNA 疫苗
1.3.4 亚单位疫苗
1.4 流感病毒反向遗传学操作技术的发展历史
1.4.1 借助辅助病毒拯救流感病毒
1.4.2 借助质粒系统拯救流感病毒
1.5 反向遗传学操作技术在流感病毒研究中的应用
1.5.1 反向遗传学操作技术与流感病毒生物学研究
1.5.2 反向遗传学操作技术与流感疫苗研究
1.5.3 反向遗传学操作技术与流感病毒载体研究
1.6 本研究的目的和意义
第二章 H5N1 亚型 AIV 遗传特性分析
2.1 材料与方法
2.1.1 病毒株
2.1.2 实验动物
2.1.3 主要试剂和仪器
2.1.4 病毒基因组 RNA 的提取及 cDNA 的合成
2.1.5 引物设计与合成
2.1.6 目的基因的 PCR 扩增
2.1.7 序列测定与分析比较
2.1.8 病毒的致病性研究
2.2 结果
2.2.1 病毒基因组序列遗传特性分析
2.2.2 病毒的致病性分析
2.3 讨论
第三章 H9N2 亚型 AIV HA 基因的遗传特性分析
3.1 材料与方法
3.1.1 病毒株
3.1.2 实验试剂和方法
3.1.3 H9N2 亚型流感病毒 HA 基因的序列分析
3.1.4 动物感染实验
3.2 结果
3.2.1 PCR 扩增结果
3.2.2 H9N2 亚型 AIV HA 基因遗传进化分析
3.2.3 HA 基因核苷酸及氨基酸的同源性分析
3.2.4 HA 基因关键位点的氨基酸序列分析
3.2.5 动物感染实验结果
3.3 讨论
第四章 H9N2 亚型 AIV 细胞培养候选疫苗株的拯救
4.1 材料与方法
4.1.1 病毒株与质粒
4.1.2 细胞及载体
4.1.3 实验动物
4.1.4 主要试剂和仪器
4.1.5 EID50和 TCID50的测定
4.1.6 pHW2000 双向转录载体的工作原理
4.1.7 rSH11 拯救的技术路线
4.1.8 rSH11 毒株的拯救
4.1.9 rSH11 的鉴定
4.1.10 动物免疫保护实验
4.1.11 HA 和 NA 基因替换重组流感病毒的拯救
4.2 结果
4.2.1 H9N2 亚型 AIV 的生长特性
4.2.2 重组质粒的 PCR 鉴定
4.2.3 聚合酶基因和核蛋白基因重组质粒表达活性的荧光鉴定
4.2.4 重组病毒的血凝活性检测
4.2.5 rSH11 的拯救
4.2.6 rSH11 的鉴定
4.2.7 rSH11 的免疫原性研究结果
4.2.8 HA 和 NA 基因替换重组流感病毒的拯救
4.3 讨论
第五章 全文结论
参考文献
附录
致谢
作者简历
本文编号：3756099
本文链接：https://www.wllwen.com/yixuelunwen/dongwuyixue/3756099.html
