非靶向代谢组学研究LPS刺激的奶牛乳腺上皮细胞代谢变化

发布时间：2023-03-06 18:41

　　奶牛乳腺上皮细胞(bovine mammary epithelial cells,bMECs)是乳腺实质的主要细胞,除泌乳外,它还是乳腺免疫的效应细胞,在受到外界刺激时能产生免疫应答反应。bMECs已被证实在受到脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激后能通过Toll样受体与NOD样受体激活NF-κB等信号通路,调控炎症介质,但在代谢物水平上的变化尚未有研究。代谢组学能对所有代谢物进行定性与定量分析,找寻代谢物与生理病理变化的关系,提供全面的生物信息。因此,为了揭示LPS刺激bMECs所影响的代谢通路,并为进一步筛选诊断与治疗奶牛乳腺炎症的生物标志物提供科学依据,进行了如下研究:1.试验分别采用组织块贴壁法与酶消化法进行bMECs的体外分离培养,对细胞进行形态学观察后,分别用角蛋白18抗体与波形蛋白抗体进行免疫荧光染色,并检测细胞β-酪蛋白基因mRNA的表达。结果显示,两种方法均能成功培养出奶牛乳腺上皮细胞。酶消化法得到细胞所用时间更短,但组织损伤较大,两种细胞混杂增加了纯化难度。而组织块贴壁法虽用时更长,但能得到数量更多且较纯的乳腺上皮细胞。鉴定结果显示,细胞呈角蛋...

【文章页数】：72 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 文献综述
    1 乳腺的防御机制
        1.1 乳腺的固有免疫与免疫细胞
        1.2 乳腺上皮细胞的免疫防御功能
    2 炎症反应
        2.1 炎性介质
        2.2 炎症反应中的环氧合酶与脂氧合酶
        2.3 脂多糖诱导乳腺上皮细胞的炎症模型
    3 代谢组学
        3.1 代谢组学研究技术
        3.2 代谢组学在医学研究中的应用
    4 本研究目的与意义
第二章 奶牛乳腺上皮细胞的分离培养与鉴定
    1 材料与方法
        1.1 试验材料
        1.2 试验方法
    2 结果与分析
        2.1 奶牛乳腺上皮细胞的原代培养
        2.2 奶牛乳腺上皮细胞的纯化与传代
        2.3 奶牛乳腺上皮细胞形态学鉴定
        2.4 奶牛乳腺上皮细胞的β-酪蛋白基因检测
        2.5 奶牛乳腺上皮细胞的荧光染色鉴定
    3 讨论
    4 小结
第三章 LPS对奶牛乳腺上皮细胞炎性介质与酶表达的影响
    1 材料与方法
        1.1 试验材料
        1.2 试验方法
    2 结果与分析
        2.1 引物特异性分析
        2.2 LPS对奶牛乳腺上皮细胞细胞因子和酶的mRNA表达的影响
        2.3 LPS对奶牛乳腺上皮细胞TNF-α、IL-6和PGE2分泌的影响
    3 讨论
    4 小结
第四章 奶牛乳腺上皮细胞炎症模型的代谢组学研究
    1 试验材料与方法
        1.1 试验材料
        1.2 试验方法
        1.3 数据处理
    2 结果与分析
        2.1 系统稳定性的分析评价
        2.2 偏最小二乘判别分析(PLS-DA)
        2.3 正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)
        2.4 单变量统计分析
        2.5 显著性差异代谢物的筛选
        2.6 差异代谢物聚类分析
        2.7 差异代谢物KEGG通路分析
    3 讨论
        3.1 对脂质代谢通路的影响
        3.2 对抗氧化途径的影响
        3.3 对其他代谢物的影响
    4 小结
结论
参考文献
致谢
作者简历



本文编号：3757177