磷酸化姬松茸多糖的制备及药理作用研究

发布时间：2017-05-18 16:07

  本文关键词：磷酸化姬松茸多糖的制备及药理作用研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：姬松茸多糖具有提高机体免疫力、降血糖、抗肿瘤生长、抗氧化、抗辐射、抗突变等多种生物活性,研究发现,多糖的活性与它本身的分子结构有着密切关系,通过化学修饰的方法可以提高多糖溶解性,增强多糖本身的生物活性。本研究探索了姬松茸多糖磷酸化的工艺方法以及磷酸化多糖的药理作用,为进一步开发新产品奠定理论基础。(1)利用大孔树脂吸附法对姬松茸多糖进行纯化,并通过单因素试验观察物料比、磷酸化试剂配比、温度、时间和pH值对姬松茸多糖磷酸根接枝量的影响,进而通过正交试验设计法得出姬松茸多糖磷酸化的最适条件。结果表明,多糖与磷酸化试剂物料比为1:3,STPP与STMP比例为6:1,温度95℃,时间5.5h,pH值为9,此时磷酸根接枝量为9.35%,为姬松茸多糖磷酸化的最佳反应条件。(2)利用腹腔注射法对小鼠进行磷酸化姬松茸多糖的急性毒性试验。安全剂量范围测定中,给药量范围0.25g/kg至5g/kg小鼠存活率均为100%。最大给药量试验中,给药剂量分别为5g/kg、10g/kg和15g/kg,通过组织学检查和血液生化指标检测,所有试验组小鼠与对照组小鼠均无显著差异。证明磷酸化姬松茸多糖对小鼠是无毒害的。(3)用磷酸化姬松茸多糖和姬松茸多糖进行了对比试验,测试两种多糖对大肠杆菌、沙门氏菌、双球菌、链球菌这四种细菌的抑菌效果。结果显示两者对大肠杆菌和沙门氏菌均有抑菌作用,且磷酸化姬松茸多糖抑菌效果较好。(4)三组小鼠分别灌服磷酸化姬松茸多糖、姬松茸多糖和生理盐水。结果显示磷酸化姬松茸多糖组的小鼠体重和免疫器官重量增长较快,显著高于姬松茸多糖组和对照组。三组小鼠的各器官均正常良好,无显著性差异。同上处理的三组小鼠灌服大肠杆菌,灌服13 d后眼球采血测定血清抗体(IgG)含量,处死后取三组小鼠脾脏,通过RT-PCR对小鼠脾脏中IL-2、IL-4、INF-γ表达水平进行测定。结果显示,一免后磷酸化姬松茸多糖组的抗体(IgG)含量显著高于生理盐水对照组;二免后磷酸化姬松茸多糖的抗体含量显著高于另两组。一免后三组小鼠的基因表达水平无显著性差异,而二免后两个多糖组小鼠的基因表达水平与对照组相比均有显著性差异,二次免疫的免疫效果优于一次免疫。结果说明姬松茸多糖磷酸化前后均可以显著提高二免小鼠血清抗体水平,均可以显著提升二免小鼠脾脏中IL-2、IL-4、INF-γ的表达,且均为磷酸化姬松茸多糖效果较好。
【关键词】：磷酸化 姬松茸多糖 抑菌 免疫调节
【学位授予单位】：天津农学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：S853.7
【目录】：

• 中文摘要13-14
• Abstract14-16
• 第一章 引言16-25
• 1 研究目的和意义16-17
• 2 研究现状17
• 3 多糖的种类和来源17-18
• 3.1 动物多糖17-18
• 3.2 植物多糖18
• 3.3 微生物多糖18
• 4 多糖的提取方法18-19
• 4.1 热水浸提法18-19
• 4.2 复合酶解法19
• 4.3 微波辅助法19
• 4.4 超声波法19
• 5 多糖的生物活性19-21
• 5.1 抗氧化作用20
• 5.2 降血糖作用20
• 5.3 免疫调节作用20-21
• 5.4 抗病毒、抗肿瘤作用21
• 6 多糖的分子修饰21-25
• 6.1 硫酸化修饰22-23
• 6.2 磷酸化修饰23
• 6.3 乙酰化修饰23-24
• 6.4 羧甲基化修饰24
• 6.5 烷基化修饰24-25
• 第二章 姬松茸多糖磷酸化修饰工艺的研究25-36
• 1 材料与方法25-27
• 1.1 材料25
• 1.2 方法25-27
• 1.2.1 对姬松茸多糖的纯化方法优选25-26
• 1.2.2 磷酸化反应条件的筛选26
• 1.2.3 多糖含量的测定26-27
• 1.2.4 磷酸根含量的测定27
• 1.2.5 磷酸化姬松茸多糖理化性质的测定27
• 2 结果与分析27-34
• 2.1 大孔树脂法对姬松茸多糖纯化方法的优选结果27-28
• 2.2 磷酸化多糖反应条件的筛选结果28-33
• 2.2.1 单因素试验结果28-31
• 2.2.2 正交试验结果31-33
• 2.3 磷酸化姬松茸多糖的理化性质测定结果33-34
• 2.3.1 外观检测结果33
• 2.3.2 磷酸化修饰前后的红外光谱图分析33-34
• 3 讨论34-36
• 3.1 大孔树脂法纯化姬松茸多糖的结果讨论34
• 3.2 磷酸化多糖反应条件的筛选结果讨论34-35
• 3.3 磷酸化姬松茸多糖的理化测定结果讨论35-36
• 第三章 磷酸化姬松茸多糖的毒性试验和体外抑菌试验36-46
• 1 磷酸化姬松茸多糖的急性毒性试验36-40
• 1.1 材料与方法36-37
• 1.1.1 材料36
• 1.1.2 动物分组方法36
• 1.1.3 方法36-37
• 1.2 结果与分析37-40
• 1.2.1 LD50测定结果37-38
• 1.2.2 最大给药量试验结果38-40
• 2 磷酸化姬松茸多糖的体外抑菌试验40-44
• 2.1 材料与方法40-41
• 2.1.1 材料40
• 2.1.2 方法40-41
• 2.2 结果与分析41-44
• 2.2.1 牛津杯法药敏试验41-42
• 2.2.2 MIC最小抑菌浓度试验结果42-44
• 3 讨论44-46
• 3.1 磷酸化姬松茸多糖的急性毒性试验讨论44-45
• 3.2 磷酸化姬松茸多糖的体外抑菌试验讨论45-46
• 第四章 磷酸化姬松茸多糖对小鼠免疫作用的研究46-66
• 1 材料与方法46-51
• 1.1 材料46
• 1.2 动物分组方法46
• 1.2.1 多糖对小鼠体重、脏器指数和组织变化试验46
• 1.2.2 酶联免疫吸附试验和免疫相关基因表达试验46
• 1.3 方法46-51
• 1.3.1 多糖对小鼠体重、脏器指数和组织变化的影响46-47
• 1.3.2 酶联免疫吸附试验47-48
• 1.3.3 磷酸化姬松茸多糖对小鼠脾脏免疫相关基因表达的影响48-51
• 2 结果与分析51-64
• 2.1 多糖对小鼠体重、脏器指数和组织变化的影响51-53
• 2.1.1 多糖对小鼠体重的影响51-52
• 2.1.2 多糖对小鼠脏器指数的影响结果52-53
• 2.1.3 组织学检查结果53
• 2.2 免疫后脏器指数及ELISA结果53-55
• 2.2.1 多糖对一免二免小鼠脏器指数的影响53-54
• 2.2.2 多糖对小鼠血清抗体影响54-55
• 2.3 多糖对小鼠脾脏三种细胞因子表达的影响55-64
• 2.3.1 RNA纯度的检测55-56
• 2.3.2 标曲、溶解和扩增曲线56-60
• 2.3.3 多糖对INF-γ、IL-2 和IL-4 表达的调控作用60-64
• 3 讨论64-66
• 3.1 多糖对小鼠体重和免疫器官指数的影响结果讨论64
• 3.2 ELISA测小鼠血清中抗体（IgG）含量结果讨论64-65
• 3.3 荧光定量PCR测多糖对小鼠基因的调控65-66
• 结论66-67
• 参考文献67-76
• 附录76-78
• 致谢78-79
• 攻读硕士学位论文期间发表的论文79

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