猪带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶的原核表达及其生物学特性分析

发布时间：2023-03-24 21:46

　　猪带绦虫(Ts)是一种重要的人畜共患寄生虫,硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx)是猪带绦虫及其幼虫重要的功能蛋白。为研究TsTPx蛋白的功能和筛选猪囊虫高效免疫靶标,提取猪带绦虫成虫总RNA,经RT-PCR扩增tstpx基因,测序分析后构建原核表达载体pET-30a(+)-tstpx,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达,用镍离子亲和层析纯化TsTPx蛋白并进行生物学特性分析,包括抗氧化功能和抗原性。结果如下:SDS-PAGE分析表明,表达的TsTPx蛋白约25ku,主要以可溶性形式存在于菌体裂解上清中。抗氧化功能分析表明,在金属催化氧化(MCO)体系中,TsTPx蛋白对质粒DNA超螺旋结构的保护率与质量浓度呈正相关,20μg·mL-1时可100%保护,电泳图谱中被氧化的开环慢迁移带完全消失;H2O2还原体系中,TsTPx蛋白对H2O2的还原率与质量浓度呈正相关,100μg·mL-1时,在含二硫苏糖醇(DTT)体系中,还原率达69.9%,在不含DTT体系中为54.5%。抗原性分析:Western blotting显示TsTPx蛋白可被猪带绦虫囊尾蚴阶段阳性血清识别,具有良好...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 实验虫体、菌种、质粒及实验动物
    1.2 引物的设计与合成
    1.3 PCR扩增
    1.4 TsTPx原核表达载体的构建
    1.5 TsTPx蛋白的诱导表达及纯化
    1.6 TsTPx蛋白的抗氧化功能分析
        1.6.1 TsTPx蛋白的质粒超螺旋结构保护试验
        1.6.2 TsTPx蛋白的H2O2还原试验
    1.7 TsTPx蛋白的抗原性分析
        1.7.1 Western blot分析
        1.7.2 动物免疫试验及抗体效价检测
2 结果
    2.1 PCR扩增
    2.2 重组表达载体的构建和鉴定
    2.3 TsTPx蛋白的诱导表达及纯化
    2.4 TsTPx的抗氧化功能分析
    2.5 TsTPx蛋白的抗原性分析
3 讨论
4 结论



本文编号：3769908