不同铁源对原代培养肉鸡鸡胚肝细胞含铁关键酶活性及其基因表达的影响

发布时间：2023-03-24 22:28

　　本论文通过3个试验,研究了不同铁源及铁水平对体外原代培养肉鸡鸡胚肝细胞铁含量、含铁关键酶活性及其基因表达以及铁蛋白基因表达的影响,从细胞及分子水平探讨了不同铁源在肉鸡肝细胞中代谢利用的机制。试验一旨在成功构建稳定、可靠的肉鸡胚肝细胞原代培养模型,为下一步不同水平铁和不同形态铁的试验奠定基础。选用健康的14胚龄爱拔益加(AA)肉鸡鸡胚为本试验的细胞供体,Leibovitz’s L-15培养液为基础培养液进行体外培养。结果表明:分离的肝细胞纯度较高、分化完全、功能健全,细胞活力好;细胞形态学、培养液乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)活性及MTT细胞持续活力结果基本相一致,即肝细胞原代培养细胞活力保持最佳的时间范围是在细胞培养的第3至6天。本试验成功建立了肉鸡鸡胚肝细胞原代培养模型,可用于后续的试验。试验二是在试验一的基础上,研究探讨了不同水平无机铁在不同孵育时间下对原代培养肉鸡鸡胚肝细胞铁含量、含铁关键酶活性及其基因表达以及铁蛋白基因表达影响,确定了鸡胚肝细胞培养最适的铁添加水平和铁作用时间,为下一步不同形态铁源的试验奠定基础。本试验采用5×3两因子完全随机设...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 铁在动物机体中的贮存和利用
    1.2 铁的生物学功能
        1.2.1 参与载体组成、转运和贮存营养素的功能
        1.2.2 抗氧化功能
        1.2.3 参与机体免疫
        1.2.4 参与电子传递
    1.3 机体中含铁关键酶及功能蛋白
    1.4 有机铁的结构与特性
    1.5 有机铁的生物学活性研究进展
        1.5.1 研究现状
        1.5.2 研究方法
            1.5.2.1 自然饲喂法
            1.5.2.2 静脉注射法
            1.5.2.3 细胞培养法
        1.5.3 评价指标
    1.6 动物肝细胞分离与其体外原代培养研究进展
        1.6.1 肝细胞分离
        1.6.2 肝细胞体外培养
        1.6.3 肝细胞供体的年龄
    1.7 立题依据与试验目的
    1.8 试验内容
第二章 原代培养肉鸡鸡胚肝细胞模型构建(试验一)
    2.1 试验目的
    2.2 材料与方法
        2.2.1 试验设计与处理
        2.2.2 试验仪器与材料
        2.2.3 试剂的配制
        2.2.4 鸡胚肝细胞消化分离
        2.2.5 肝细胞纯化
        2.2.6 细胞计数及细胞活力检测
        2.2.7 肝细胞原代培养
        2.2.8 形态学鉴定
        2.2.9 肝细胞染色鉴定
        2.2.10 样品采集与制备
        2.2.11 样品分析
        2.2.12 数据统计与分析
    2.3 结果
        2.3.1 形态学观察结果
        2.3.2 PAS糖原染色结果
        2.3.3 细胞培养液中LDH活性
        2.3.4 MTT细胞持续活力测定
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 不同铁水平及孵育时间对原代培养肉鸡鸡胚肝细胞含铁关键酶活性及其基因表达的影响(试验二)
    3.1 试验目的
    3.2 材料与方法
        3.2.1 试验设计与处理
        3.2.2 试验试剂
        3.2.3 试剂配制
        3.2.4 鸡胚肝细胞铁孵育液处理
        3.2.5 样品采集与制备
        3.2.6 样品分析
        3.2.7 数据统计分析
    3.3 结果
        3.3.1 添加铁水平和孵育时间对肉鸡鸡胚肝细胞铁含量的影响
        3.3.2 添加铁水平和孵育时间对肉鸡鸡胚肝细胞含铁关键酶活性的影响
        3.3.3 添加铁水平和孵育时间对肉鸡鸡胚肝细胞中含铁关键酶及铁蛋白的mRNA表达水平的影响
        3.3.4 添加铁水平和孵育时间对肉鸡鸡胚肝细胞含铁关键酶及铁蛋白的蛋白表达水平的影响
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章 不同形态铁源对原代培养肉鸡鸡胚肝细胞含铁关键酶活性及基因表达的影响(试验三)
    4.1 试验目的
    4.2 材料与方法
        4.2.1 试验设计与处理
        4.2.2 试验试剂
        4.2.3 试剂配制
        4.2.4 原代鸡胚肝细胞的分离、培养及处理
        4.2.5 样品采集与制备
        4.2.6 样品分析
        4.2.7 数据统计与分析
    4.3 结果
        4.3.1 添加铁源和铁水平对肉鸡鸡胚肝细胞铁含量的影响
        4.3.2 添加铁源和铁水平对肉鸡鸡胚肝细胞含铁酶活性的影响
        4.3.3 添加铁源和铁水平对肉鸡鸡胚肝细胞含铁酶及铁蛋白mRNA表达水平的影响
        4.3.4 添加铁源和铁水平对肉鸡鸡胚肝细胞含铁酶及铁蛋白的蛋白表达水平的影响
    4.4 讨论
    4.5 小结
第五章 全文结论及有待进一步研究的问题
    5.1 主要结论
    5.2 创新点
    5.3 有待进一步研究的问题
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3769969