ISG15蛋白稳定表达细胞系的构建及其与猪源BVDV-2相互作用初步研究

发布时间：2023-03-26 18:57

　　牛病毒性腹泻病毒(Bovine Viral Diarrhea Virus, BVDV)是黄病毒科瘟病毒属成员,除感染牛外,它还能引起猪、羊、鹿以及多种野生动物发病。近年来,猪群感染BVDV的现象日益严重,而且主要是持续性感染。如果母畜在孕期前30-120天内感染非致细胞病变型(noncytopathic, NCP) BVDV,此时胎儿免疫系统尚未发育完全,不能识别外源NCP型BVDV为抗原,因此容易造成胎儿持续感染BVDV,成为主要传染源之一。研究表明只有NCP型BVDV感染才能产生持续性感染,而病毒逃逸细胞先天免疫是建立细胞持续感染的第一步。因此,了解猪源BVDV逃逸细胞先天免疫的机制,有助于我们解释BVDV持续性感染的作用机制,从而制定更全面的BVDV防控措施。 ISG15(interferon-stimylated genel5, ISG15)是泛素样蛋白(UBL)家族的重要成员,与干扰素有密切关系,是干扰素诱导表达最强的ISG之一,也是第一个被鉴定的ISG。ISG15可抑制多种DNA病毒和RNA病毒的增殖,在抗病毒免疫中具有不容忽视的地位,现已证明ISG15在抗1型HIV病毒、...

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【学位级别】：硕士

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中文摘要
Abstract
符号说明
文献综述
    一、牛病毒性腹泻病毒的研究进展
        1、牛病毒性腹泻病毒生物学特性及分类
        2、牛病毒性腹泻病毒的致病性
        3、牛病毒性腹泻病毒的流行现状
        4、猪源BVDV感染对猪的影响
        5、猪群中BVDV的鉴定
        6、猪源BVDV在国内的流行传播
        7、牛病毒性腹泻病毒的防控
    二、干扰素刺激因子ISG15
        1、ISG15蛋白结构
        2、ISG15的类泛素化修饰系统
        3、ISG15与病毒相互作用
    参考文献
第一章 ISG15的原核表达及多抗血清的制备
    摘要
    Abstract
    1. 材料
        1.1 细胞、菌株和载体
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器设备
        1.4 实验动物
    2. 方法
        2.1 引物设计
        2.2 氯化钙法制备DH5α感受态细胞
        2.3 碱裂解法小提质粒
        2.4 干扰素刺激因子ISG15的克隆
        2.5 重组原核表达质粒的构建与鉴定
        2.6 ISG15在pCold-TF载体中的原核表达
        2.7 ISG15重组蛋白的纯化及浓度测定
        2.8 ISG15重组蛋白多抗血清的制备与鉴定
    3. 结果
        3.1 ISG15基因的PCR产物
        3.2 重组T载体质粒的鉴定
        3.3 原核表达重组质粒的鉴定
        3.4 ISG15重组蛋白的表达与鉴定
        3.5 ISG15多克隆抗体的鉴定
    4. 讨论
    参考文献
第二章 稳定表达ISG15蛋白的细胞系的构建与鉴定
    摘要
    Abstract
    1. 材料
        1.1 质粒、病毒和细胞
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
    2. 方法
        2.1 引物设计
        2.2 ISG15基因的PCR扩增及克隆
        2.3 ISG15重组真核表达质粒的构建与鉴定
        2.4 重组真核表达质粒的提纯
        2.5 稳定表达ISG15蛋白细胞系的构建与筛选
        2.6 稳定表达ISG15蛋白细胞系的鉴定
    3. 结果
        3.1 ISG15基因的PCR扩增产物
        3.2 重组质粒pEASY-ISG15’的鉴定
        3.3 重组真核表达质粒的鉴定
        3.4 稳定表达ISG15蛋白细胞系的鉴定
    4. 讨论
    参考文献
第三章 ISG15和猪源BVDV-2相互作用探究
    摘要
    Abstract
    1. 材料
        1.1 病毒和细胞
        1.2 主要试剂
        1.3 主要仪器
    2. 方法
        2.1 引物设计
        2.2 病毒的增殖与培养
        2.3 病毒效价TCID50的测定
        2.4 病毒滴度增长曲线的绘制
        2.5 荧光定量PCR
    3. 结果
        3.1 ISG15蛋白对猪源BVDV-2复制的影响
        3.2 猪源BVDV-2感染对ISG15基因表达的影响
        3.3 ISG15蛋白对猪源BVDV-2诱导Ⅰ型干扰素表达的影响
    4. 讨论
    参考文献
全文小结
攻读学位期间发表的学术论文
以主要作者参编的著作
致谢



本文编号：3771520