2个枯草芽孢杆菌源纤维素酶基因的克

发布时间：2023-04-21 00:18

　　本试验旨在构建不同纤维素酶的融合表达系统及探讨融合纤维素酶的酶学性质。利用PCR技术从实验室前期分离的枯草芽孢杆菌中分别扩增2个纤维素酶基因Cel42和Cel22,设计一段柔性接头(GSGGGS),通过酶切连接将2个纤维素酶基因构建在一个开放阅读框(ORF)内,插入到pET32a(+)中构建重组表达载体pET32a(+)-Cel42-Cel22,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,并对其酶学性质进行研究。结果表明:本试验成功克隆了2个纤维素酶基因Cel42和Cel22,并构建了重组表达系统BL21(DE3)/pET32a(+)-Cel42-Cel22,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)估计其分子质量约为101 ku,粗酶液中葡聚糖内切酶活性为57.62 U/mL,葡聚糖外切酶活性为32.57 U/mL。试验所得融合纤维素酶Cel42-Cel22的最适反应温度为50℃,最适反应pH为6.0,温度在30⁷0℃范围内时可维持70%以上的纤维素酶活性,pH在4.0⁹.0范围内时可保持75%以上的纤维素酶活性,除Mn^...

【文章页数】：9 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 菌株和质粒
        1.1.2 酶和主要试剂
    1.2 方法
        1.2.1 目的基因的克隆
        1.2.2 融合表达载体的构建
        1.2.3 重组质粒的转化及十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS#PAGE) 检测
        1.2.4 融合纤维素酶Cel42#Cel22的酶活性测定
            1.2.4. 1 葡聚糖内切酶活性测定
            1.2.4. 2 葡聚糖外切酶活性测定
        1.2.5 融合纤维素酶Cel42#Cel22的最适反应温度与热稳定性
        1.2.6 融合纤维素酶Cel42#Cel22的最适反应pH及酸碱稳定性
        1.2.7 金属离子对融合纤维素酶Cel42#Cel22活性的影响
        1.2.8 数据统计与分析
2 结果
    2.1 纤维素酶基因Cel42和Cel22的克隆结果
    2.2 重组质粒pMD18#Cel42#Cel22的PCR扩增及酶切鉴定结果
    2.3 重组质粒pET32a (+) #Cel42#Cel22的PCR扩增及酶切鉴定结果
    2.4 融合蛋白的表达
    2.5 融合纤维素酶Cel42#Cel22酶活性的测定结果
    2.6 温度对融合纤维素酶Cel42#Cel22活性及稳定性的影响
    2.7 pH对融合纤维素酶Cel042#Cel22活性及稳定性的影响
    2.8 金属离子对融合纤维素酶Cel042#Cel22活性的影响
3 讨论
4 结论



本文编号：3795455