猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp4抗体制备与鉴定

发布时间：2023-04-25 21:10

　　为了获得猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)nsp4的抗体,根据HP-PRRSV TA-12株(Gen Bank Accession No.HQ416720)的nsp4基因序列,设计并合成一对引物。用RT-PCR扩增后克隆到原核表达载体p ET-28a(+)中,构建重组质粒p ET28a-nsp4,转化至Trasseta(DE3),经IPTG诱导重组蛋白获得了高效可溶性表达,大小约为26 k Da。经镍离子亲和柱(Ni+-NTA)纯化获得了高纯度重组蛋白,将纯化的nsp4蛋白免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体。ELISA检测抗体效价可达106,Western blotting和IFA检测结果表明所制备的多克隆抗体具有良好的免疫反应特异性,能够识别PRRSV感染宿主细胞中的nsp4蛋白。本研究成功制备了针对nsp4的多克隆抗体,为进一步研究nsp4的功能及PRRSV致病机制奠定了基础。

【文章页数】：8 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 毒株、菌株与载体
    1.2 主要试剂
    1.3 引物的设计与合成
    1.4 病毒RNA提取及RT-PCR
    1.5 重组表达质粒的构建
    1.6 重组蛋白表达、纯化及SDS-PAGE分析
    1.7 Western blotting鉴定结果
    1.8 nsp4蛋白多抗血清的制备
    1.9 ELISA效价的测定
    1.1 0 多抗血清特异性检测
        1.1 0. 1 Western blotting分析
        1.1 0. 2 IFA
2 结果与分析
    2.1 目的基因的获取
    2.2 表达载体的构建与鉴定
    2.3 nsp4重组蛋白的表达
    2.4 nsp4的纯化
    2.5 重组蛋白nsp4抗血清的ELISA效价测定
    2.6 多抗血清特异性检测
        2.6.1 Western blotting鉴定结果
        2.6.2 IFA结果
3 讨论



本文编号：3801070