天府肉羊MYOZ2和MYOZ3基因的克隆及其在肌肉组织和部分器官中的表达分析

发布时间：2023-05-07 01:02

　　肉质是畜禽生产的重要经济性状,其中一个重要的影响因素就是肌纤维。肌纤维类型与肉质的关系十分密切,其中慢肌纤维比例高的肌肉肉质更好,它是在很多基因控制下的产物。钙调磷酸酶(calcineurin,CaN)是一种常见的细胞信号分子,它参与的CaN/NFAT信号通路可以影响肌纤维类型,尤其是对促进慢肌纤维的转变有重要的作用。研究发现钙调磷酸酶肌小节结合蛋白基因家族(MYOZs)可以通过改calcineurin的活性来影响肌纤维类型的转变,从而影响畜禽的肉质。为了探究天府肉羊MYOZ2基因和MYOZ3基因在肌纤维转化方面的作用,本试验利用反转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)、分子克隆、实时荧光定量(RT-qPCR)以及蛋白免疫印迹法(western blotting)等实验技术对MYOZ2基因和MYOZ3基因进行了初步的研究,结果如下：1.本研究成功获得天府肉羊MYOZ2基因和MYOZ3基因的cDNA全部编码序列,MYOZ2基因序列长856bp,包含一个长度为795bp的ORF框,编码264个氨基酸...

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摘要
Abstract
常用词语缩写
1 文献综述
    1.1 肌纤维的类型
    1.2 肌纤维的特点
    1.3 Ⅰ型肌纤维对肌肉品质的影响
        1.3.1 肉色
        1.3.2 pH值
        1.3.3 嫩度
        1.3.4 风味
        1.3.5 系水力
    1.4 钙调磷酸酶在肌纤维分化上的作用
    1.5 钙调磷酸酶肌小节结合蛋白家族的研究现状
    1.6 本研究目的及意义
2 材料与方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验动物及样品采集
        2.1.2 主要仪器设备
        2.1.3 主要试剂及试剂盒
        2.1.4 主要试剂的配制
    2.2 试验方法
        2.2.1 组织样总RNA的抽取
        2.2.2 总RNA的质量与浓度检测
        2.2.3 cDNA第一条链的合成
        2.2.4 特异性引物设计
        2.2.5 MYOZ2和MYOZ3基因的cDNA的克隆测序
            2.2.5.1 常规PCR
            2.2.5.2 PCR产物的纯化回收
            2.2.5.3 目的基因与pMD19-T载体的连接
            2.2.5.4 连接产物的转化
            2.2.5.5 阳性克隆筛选及测序
        2.2.6 荧光定量PCR
            2.2.6.1 标准品的制备
            2.2.6.2 定量PCR
        2.2.7 蛋白免疫印迹
            2.2.7.1 组织总蛋白的提取
            2.2.7.2 组织样蛋白含量测定
            2.2.7.3 SDS-聚丙酰胺凝胶电泳
            2.2.7.4 切胶与转膜
            2.2.7.5 免疫反应
            2.2.7.6 化学发光与成像
    2.3 数据分析
3 结果与分析
    3.1 天府肉羊MYOZ2和MYOZ3基因的克隆
        3.1.1 组织样的总RNA提取
        3.1.2 PCR结果
        3.1.3 克隆产物测序结果
    3.2 天府肉羊MYOZ2和MYOZ3基因生物信息学分析
        3.2.1 天府肉羊MYOZ2基因的生物信息学分析
            3.2.1.1 天府肉羊MYOZ2基因的序列比对
            3.2.1.2 MYOZ2基因CDS序列的碱基组成
            3.2.1.3 MYOZ2蛋白性质分析
            3.2.1.4 MYOZ2蛋白结构预测
            3.2.1.5 MYOZ2的系统发育分析
        3.2.2 天府肉羊MYOZ3基因的生物信息学分析
            3.2.2.1 天府肉羊MYOZ3基因的序列比对
            3.2.2.2 MYOZ3基因CDS序列的碱基组成
            3.2.2.3 MYOZ3蛋白性质分析
            3.2.2.4 MYOZ3蛋白结构预测
            3.2.2.5 MYOZ3的系统发育分析
    3.3 mRNA的表达
        3.3.1 标准曲线的绘制
        3.3.2 天府肉羊MYOZ2和MYOZ3基因的mRNA表达
            3.3.2.1 天府肉羊MYOZ2基因的mRNA表达
            3.3.2.2 天府肉羊MYOZ3基因的mRNA表达
    3.4 蛋白质的表达
        3.4.1 天府肉羊MYOZ2蛋白的表达
        3.4.2 天府肉羊MYOZ3的蛋白表达
4 讨论
    4.1 MYOZ2基因和MYOZ3基因的生物信息学分析
        4.1.1 MYOZ2基因和MYOZ3基因的序列分析
        4.1.2 MYOZ2蛋白和MYOZ3蛋白的理化性质分析
        4.1.3 MYOZ2蛋白和MYOZ3蛋白结构的预测分析
    4.2 mRNA的表达分析
        4.2.1 不同组织表达分析
        4.2.2 不同生长阶段表达分析
    4.3 蛋白质的表达分析
        4.3.1 不同组织表达分析
        4.3.2 不同生长阶段表达分析
5 结论
参考文献
致谢
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本文编号：3809941