内蒙古地区优势蚊种的基因多态性分析及西尼罗病毒检测方法的建立

发布时间：2023-05-07 16:48

　　随着全球气候的变化、生态环境的不断恶化、城镇化程度的加快、各国之间的贸易往来频繁及交通工具运输的快捷便利,全世界蚊媒传染病发病呈上升趋势,已有蚊媒传染病的流行区域不断扩大、疾病的流行频度不断加强。内蒙古拥有广袤的草原,水草丰茂,牛羊较多,与蒙古国,俄罗斯相接壤,边境线很长,独特的气候环境和地理环境给蚊虫带来滋生的空间。为了解内蒙古呼伦贝尔和锡林郭勒盟边境地区优势蚊虫种类,并对其保守基因COI的基因多态性分析。应用传统形态学和分子生物学相结合的方法,对该地区10个采样点进行蚊虫种型的鉴定和基因多态性分析,并对蚊虫体内是否携带西尼罗病毒初步进行检测。方法:在2018-2019年间,从内蒙古呼伦贝尔地区和锡林郭勒盟地区的草地上采集蚊虫样本。通过传统形态学鉴定方法,对蚊虫样本进行显微镜下观察后初步确定其种型。再采用聚合酶链式反应(PCR)对蚊虫的线粒体细胞色素C氧化酶I基因(COI)基因序列进行扩增,测序后对蚊虫的基因序列进行同源性分析和遗传进化分析,即应用Mega6.06软件构建系统进化树,与GenBank数据库中已知蚊虫的COI基因进行聚类分析,以确定蚊子进化的规律;通过相关生物软件分析其...

【文章页数】：46 页

【学位级别】：硕士

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摘要
Abstract
1 引言
    1.1 研究背景
        1.1.1 蚊虫的概述
        1.1.2 蚊虫的分类
        1.1.3 蚊虫分布
    1.2 蚊子的种型鉴定方法
        1.2.1 传统形态学鉴定方法
        1.2.2 分子生物学鉴定方法
    1.3 蚊传疾病
        1.3.1 蚊传疾病的流行情况
        1.3.2 蚊传疾病的防治
    1.4 本研究的目的和意义
2 试验材料
    2.1 蚊虫的采集
    2.2 培养基及缓冲液
    2.3 试剂耗材
    2.4 仪器设备
3 方法
    3.1 蚊虫的种型鉴定
        3.1.1 形态学鉴定
        3.1.2 分子生物学鉴定
        3.1.3 数据处理分析
    3.2 在蚊虫体内西尼罗病毒的检测
        3.2.1 蚊虫总RNA的提取
        3.2.2 TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立
4 结果
    4.1 蚊虫种型鉴定及基因多态性结果
        4.1.1 蚊虫的形态学鉴定结果
        4.1.2 蚊虫COI基因的扩增和同源性分析结果
        4.1.3 蚊虫的COI基因序列遗传进化树结果
        4.1.4 蚊虫COI基因序列组成及核苷酸不同位点碱基替代类型结果
        4.1.5 遗传距离分析结果
        4.1.6 COI基因遗传多样性和单倍型分析结果
    4.2 在蚊虫体内西尼罗病毒检测结果
        4.2.1 TaqMan实时荧光定量PCR标准曲线绘制结果
        4.2.2 TaqMan实时荧光定量PCR特异性试验结果
        4.2.3 TaqMan实时荧光定量PCR灵敏性试验结果
        4.2.4 TaqMan实时荧光定量PCR方法检测样品结果
5 讨论
6 结论
致谢
参考文献
作者简介



本文编号：3810949