梅花鹿成熟型TGF-β1基因的克隆与结构分析及其在鹿茸顶端组织中的表达

发布时间：2023-05-14 07:32

　　为探究细胞因子对鹿茸再生的影响,提取鹿茸顶端组织总RNA(Trizol法),反转录获得cDNA模板,克隆TGF-β1成熟肽基因。利用生物信息学软件,对其基因序列及蛋白质结构进行分析。结果表明:成功获得梅花鹿TGF-β1成熟肽基因,序列长339 bp,共编码112个氨基酸,蛋白性质稳定,理论分子质量约为12.8 kD。同源性分析结果显示,TGF-β1在进化过程中具有高度保守性,梅花鹿与牛、羊、猪、人、鼠的核苷酸序列同源性均>90%;除鼠外,梅花鹿与其他物种氨基酸序列并未发生变化。免疫组化结果显示,TGF-β1在鹿茸顶端不同组织中差异表达,软骨层中表达水平最高。由此推测,TGF-β1在鹿茸再生过程中可能发挥重要作用。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 供试材料
    1.2 试剂与仪器
    1.3 鹿茸顶端组织总RNA提取及cDNA合成
    1.4 梅花鹿成熟型 TGF-β1 基因的克隆
    1.5 梅花鹿成熟型 TGF-β1 的序列分析
    1.6 免疫组化法检测TGF-β1的相对表达水平
2 结果与分析
    2.1 鹿茸顶端组织总RNA的提取
    2.2 成熟型TGF-β1基因的PCR扩增
    2.3 重组质粒pMD-19T-TGF-β1的PCR鉴定及双酶切反应鉴定
    2.4 核苷酸序列及氨基酸序列的同源性比较分析
    2.5 成熟型TGF-β1基因结构的生物信息学分析
        2.5.1 成熟型TGF-β1基因的理化性质分析
        2.5.2 成熟型TGF-β1蛋白的翻译后修饰分析
        2.5.3 成熟型TGF-β1
    2.6 TGF-β1在鹿茸顶端不同组织的相对表达水平分析
3 讨 论



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