西藏环状病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立

发布时间：2023-05-17 19:36

　　为了建立检测西藏环状病毒(Tibet orbivirus,TIBOV)的快速核酸检测方法,根据新分离的西藏环状病毒(DH13C120)Seg-10基因序列,设计了特异性引物及探针。通过优化反应条件,建立了检测西藏环状病毒核酸的荧光定量RT-PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行了检测。结果显示,该方法在2.31×10⁸～2.31×10²copies/μL质粒标准品浓度之间具有良好的线性关系,相关系数为0.999;组内与组间的变异系数均小于2%;最低检测下限为2.31×10¹copies/μL;对蓝舌病病毒、鹿流行性出血热病毒、阿卡斑病毒、盖塔病毒和流行性乙型脑炎病毒检测结果均为阴性,无交叉反应;对云南新分离的9株西藏环状病毒进行检测,拷贝数在3.23×10⁵～1.54×10⁶copies/μL之间,准确率为100%;对2013年采集自云南江城县的48份牛血液样品进行检测,检出西藏环状病毒阳性3份。结果表明,本研究建立的西藏环状病毒荧光定量RT-PCR检测方法具有良好...

【文章页数】：5 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 病毒株
    1.2 主要试剂和仪器
    1.3 引物及探针的设计与合成
    1.4 病毒RNA提取及c DNA合成
    1.5 重组质粒标准品的制备
    1.6 反应条件的优化
    1.7 标准曲线的建立
    1.8 特异性试验
    1.9 敏感性试验
    1.1 0 重复性试验
    1.1 1 荧光定量RT-PCR方法的应用
2 结果
    2.1 重组质粒标准品的制备
    2.2 反应条件的优化
    2.3 标准曲线的建立
    2.4 特异性分析
    2.5 敏感性分析
    2.6 重复性分析
    2.7 样品检测
3 讨论



本文编号：3817860