猪繁殖与呼吸综合征病毒GP2蛋白B细胞表位和T细胞表位筛选
发布时间：2023-05-26 22:40
猪繁殖与呼吸综合征是动物二类传染病,俗称蓝耳病,可通过个体接触、污染物和空气传播。PRRS现已成为规模化养猪场的主要疫病之一,给世界养猪产业造成了重大的经济损失。猪繁殖与呼吸综合征病毒颗粒呈椭球体,由囊膜包裹,直径在5074 nm之间。根据病毒基因序列和抗原性等方面的差异,又将其分为基因Ⅰ型和基因Ⅱ型。PRRSV因其抑制先天性免疫应答的能力,目前仍然是严重危胁养猪业安全的病原之一。研究表明,获得性免疫应答反应在PRRSV感染的机体内起着关键性的免疫保护作用,而PRRSV GP2蛋白不仅是病毒侵染宿主细胞的必要结构蛋白,还能引起宿主产生明显的获得性免疫应答。本研究通过合成GP2蛋白的重叠多肽,采用间接ELISA和IFN-γELISPOT的方法筛选并得到了GP2蛋白3个B细胞表位和6个T细胞表位,为新型表位疫苗的研究提供帮助。将实验室保存的PRRSV JXA1-R毒株进行扩增,根据Reed-Muench两氏法测定其病毒滴度为106.6.6 TCID50/mL。提取JXA1-R毒株总RNA并逆转录成cDNA,以cDNA为模板扩...
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
1.1 PRRSV的危害
1.2 PRRSV的分子病原学
1.2.1 形态结构及理化性质
1.2.2 PRRSV的基因组构成
1.2.3 PRRSV的主要结构蛋白
1.2.4 PRRSV的次要囊膜蛋白
1.3 PRRSV的流行病学概述
1.3.1 PRRSV的传播途径
1.3.2 PRRSV的宿主特异性
1.3.3 PRRSV的感染特征
1.4 PRRSV感染诱导的特异性免疫应答反应
1.4.1 体液免疫
1.4.2 细胞免疫
1.5 PRRS的防控及诊断
1.5.1 PRRS的防控
1.5.2 PRRS的诊断
1.6 抗原表位研究进展
1.6.1 PRRSV结构蛋白T细胞表位研究现状
1.6.2 PRRSV结构蛋白B细胞表位研究现状
1.7 研究目的及意义
2 PRRSVGP2蛋白基因扩增及原核表达
2.1 试验材料
2.1.1 病毒株、载体、菌株和细胞
2.1.2 试验试剂及试剂盒
2.1.3 主要试验仪器与耗材
2.1.4 试剂配制方法
2.2 试验方法
2.2.1 PRRSVJXA1-R毒株扩繁
2.2.2 病毒感染力测定
2.2.3 ORF2目的基因获取
2.2.4 克隆载体构建并回收测序
2.2.5 GP2蛋白原核表达载体构建
2.2.6 GP2蛋白的表达纯化与鉴定
2.3 试验结果
2.3.1 病毒感染力测定
2.3.2 ORF2目的基因获取
2.3.3 ORF2克隆载体鉴定并测序
2.3.4 GP2蛋白表达载体构建
2.3.5 GP2蛋白的表达纯化及WesternBlot鉴定
2.4 讨论
2.5 小结
3 PRRSVGP2蛋白B细胞、T细胞表位筛选
3.1 试验材料
3.1.1 病毒株和试验动物
3.1.2 试验试剂及试剂盒
3.1.3 主要试验仪器与耗材
3.1.4 试剂配制方法
3.2 试验方法
3.2.1 试验猪PRRSV抗体检测
3.2.2 试验动物免疫
3.2.3 分离血清样品与外周血单核细胞
3.2.4 GP2蛋白抗体检测
3.2.5 GP2蛋白重叠多肽设计
3.2.6 GP2蛋白B细胞表位筛选
3.2.7 B细胞表位保守性分析
3.2.8 GP2蛋白T细胞表位筛选
3.3 试验结果
3.3.1 试验猪PRRSV抗体检测
3.3.2 GP2蛋白抗体水平检测
3.3.3 GP2蛋白重叠多肽合成
3.3.4 GP2蛋白B细胞表位筛选
3.3.5 B细胞表位保守性分析
3.3.6 GP2蛋白T细胞表位筛选
3.4 讨论
3.5 小结
4 结论
参考文献
附录 英文缩略词表
致谢
个人简历
本文编号：3823394
【文章页数】：71 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
Abstract
1 文献综述
1.1 PRRSV的危害
1.2 PRRSV的分子病原学
1.2.1 形态结构及理化性质
1.2.2 PRRSV的基因组构成
1.2.3 PRRSV的主要结构蛋白
1.2.4 PRRSV的次要囊膜蛋白
1.3 PRRSV的流行病学概述
1.3.1 PRRSV的传播途径
1.3.2 PRRSV的宿主特异性
1.3.3 PRRSV的感染特征
1.4 PRRSV感染诱导的特异性免疫应答反应
1.4.1 体液免疫
1.4.2 细胞免疫
1.5 PRRS的防控及诊断
1.5.1 PRRS的防控
1.5.2 PRRS的诊断
1.6 抗原表位研究进展
1.6.1 PRRSV结构蛋白T细胞表位研究现状
1.6.2 PRRSV结构蛋白B细胞表位研究现状
1.7 研究目的及意义
2 PRRSVGP2蛋白基因扩增及原核表达
2.1 试验材料
2.1.1 病毒株、载体、菌株和细胞
2.1.2 试验试剂及试剂盒
2.1.3 主要试验仪器与耗材
2.1.4 试剂配制方法
2.2 试验方法
2.2.1 PRRSVJXA1-R毒株扩繁
2.2.2 病毒感染力测定
2.2.3 ORF2目的基因获取
2.2.4 克隆载体构建并回收测序
2.2.5 GP2蛋白原核表达载体构建
2.2.6 GP2蛋白的表达纯化与鉴定
2.3 试验结果
2.3.1 病毒感染力测定
2.3.2 ORF2目的基因获取
2.3.3 ORF2克隆载体鉴定并测序
2.3.4 GP2蛋白表达载体构建
2.3.5 GP2蛋白的表达纯化及WesternBlot鉴定
2.4 讨论
2.5 小结
3 PRRSVGP2蛋白B细胞、T细胞表位筛选
3.1 试验材料
3.1.1 病毒株和试验动物
3.1.2 试验试剂及试剂盒
3.1.3 主要试验仪器与耗材
3.1.4 试剂配制方法
3.2 试验方法
3.2.1 试验猪PRRSV抗体检测
3.2.2 试验动物免疫
3.2.3 分离血清样品与外周血单核细胞
3.2.4 GP2蛋白抗体检测
3.2.5 GP2蛋白重叠多肽设计
3.2.6 GP2蛋白B细胞表位筛选
3.2.7 B细胞表位保守性分析
3.2.8 GP2蛋白T细胞表位筛选
3.3 试验结果
3.3.1 试验猪PRRSV抗体检测
3.3.2 GP2蛋白抗体水平检测
3.3.3 GP2蛋白重叠多肽合成
3.3.4 GP2蛋白B细胞表位筛选
3.3.5 B细胞表位保守性分析
3.3.6 GP2蛋白T细胞表位筛选
3.4 讨论
3.5 小结
4 结论
参考文献
附录 英文缩略词表
致谢
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本文编号：3823394
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