H5、H7和H9亚型禽流感病毒四重荧光RT-PCR检测方法的建立与应用

发布时间：2023-06-02 04:29

　　旨在提高对禽流感病毒(avian influenza virus, AIV)检测效率,及时发现疫病。本研究通过分析M基因以及H5、H7和H9亚型的HA基因序列保守区域,设计并合成了相关探针和引物,建立了禽流感病毒(AIV)四重荧光RT-PCR检测方法,该方法可在检测禽流感病毒(AIV)的同时,确定病原是否为H5、H7和H9亚型。结果显示,该检测方法耗时短、特异性好、检测下限达到10^-5 ng·μL^-1。采用该方法检测临床采集的13个活禽交易市场的384份禽咽喉和泄殖腔双拭子样品,经检测,其中有60份样品为流感病毒阳性,且全部是H9亚型,该结果与行业标准方法(NY/T 772—2013)检测结果一致,κ值为1 (P<0.001)。本方法能实现对禽流感病毒及H5、H7和H9亚型的高通量快速检测,将在AIV快速检测中发挥重要作用。

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 主要仪器试剂
    1.2 毒株和核酸提取
    1.3 引物和探针筛选
    1.4 反应体系与反应条件
    1.5 特异性和灵敏度评估
    1.6 临床样品检测
2 结 果
    2.1 引物和探针筛选
    2.2 特异性
    2.3 灵敏度
        2.3. 1 M基因检测引物及探针灵敏度试验
        2.3.2 H5亚型检测引物及探针灵敏度试验
        2.3.3 H7亚型检测引物及探针灵敏度试验
        2.3.4 H9亚型检测引物及探针灵敏度试验
    2.4 临床试验结果
3 讨 论
4 结 论



本文编号：3827666