丁酸梭菌及其磷壁酸与肠道细胞互作的分子机制研究

发布时间：2023-06-04 00:41

　　本试验旨在研究丁酸梭菌及其磷壁酸对肠道细胞作用的分子机制。以人体结肠腺癌细胞HT-29细胞为试验对象,将其接种于六孔板上。TX-114法提取丁酸梭菌的磷壁酸,利用红外光谱(IR)及核磁共振氢谱(NMR)检测提取磷壁酸的纯度；分别用浓度为0,50μg/mL、80μg/mL的磷壁酸处理细胞24h后,加入FITC标记的浓度为109CFU/mL的丁酸梭菌,孵育2h后,于荧光倒置显微镜下观察细菌的粘附情况；分别用浓度为0、10CFU/mL、103CFU/mL、105CFU/mL、107CFU/mL、109CFU/mL的丁酸梭菌以及浓度为0.10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、80μg/mL、100μg/mL的磷壁酸处理HT-29细胞12h,Trizol法提取细胞总RNA,反转录得到cDNA,利用RT-PCR技术分析IL-6、IL-8、IL-10、Hsp、TNF-α、NF-κB等免疫因子的表达水平；分别用浓度为0、10CFU/mL、103CFU/mL、105CFU/mL、107CFU/mL、109CFU/mL的丁酸梭菌以及浓度为0、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、80μ...

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【学位级别】：硕士

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符号说明
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 研究背景
        1.1.1 肠道微生物与宿主的关系
        1.1.2 肠道微生物对宿主肠道免疫及发育的影响
        1.1.3 肠道微生物对宿主肠道炎症的影响
        1.1.4 肠道微生物对宿主代谢的影响
    1.2 丁酸梭菌的应用研究进展
        1.2.1 丁酸梭菌简介
        1.2.2 丁酸梭菌的生物学作用
        1.2.3 丁酸梭菌在治疗人类疾病方面的应用
        1.2.4 丁酸梭菌在动物生产中的应用
        1.2.5 丁酸梭菌作用机理分析
        1.2.6 丁酸梭菌应用中存在的问题
    1.3 磷壁酸的研究进展
        1.3.1 磷壁酸对革兰氏阳性菌的作用
        1.3.2 磷壁酸的生物合成
    1.4 研究内容和路线
2 材料与方法
    2.1 丁酸梭菌磷壁酸的提取、纯化
        2.1.1 试验材料
        2.1.2 试验设计
        2.1.3 测定方法
        2.1.4 统计分析
    2.2 磷壁酸对丁酸梭菌与HT-29细胞粘附率的影响
        2.2.1 试验材料
        2.2.2 试验设计
        2.2.3 测定方法
        2.2.4 统计分析
    2.3 丁酸梭菌及其磷壁酸对肠道细胞免疫因子mRNA表达量的影响
        2.3.1 试验材料
        2.3.2 试验设计
        2.3.3 测定方法
        2.3.4 统计分析
    2.4 丁酸梭菌及其磷壁酸对HT-29细胞外蛋白质表达量的影响
        2.4.1 试验材料
        2.4.2 试验设计
        2.4.3 测定方法
        2.4.4 统计分析
3 结果与分析
    3.1 磷壁酸的提取、纯化
    3.2 磷壁酸对丁酸梭菌与HT-29细胞粘附率的影响
    3.3 丁酸梭菌及其磷壁酸对肠道细胞免疫因子mRNA表达水平的影响
        3.3.1 丁酸梭菌及其磷壁酸对IL-8、IL-6、TNF-α表达水平的影响
        3.3.2 丁酸梭菌及其磷壁酸对HT-29细胞IL-10、Hsp70表达水平的影响
        3.3.3 丁酸梭菌及其磷壁酸对HT-29细胞NF-κB表达水平的影响
    3.4 丁酸梭菌及其磷壁酸对HT-29细胞外蛋白质表达量的影响
        3.4.1 丁酸梭菌对细胞外蛋白质IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α表达量的影响
        3.4.2 磷壁酸对细胞外蛋白质IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α表达量的影响
4 讨论
    4.1 磷壁酸的提取、纯化
    4.2 磷壁酸对丁酸梭菌与HT-29细胞粘附率的影响
    4.3 丁酸梭菌及其磷壁酸对肠道细胞免疫因子表达量的影响
5 结论与展望
    5.1 总体结论
    5.2 课题创新点
    5.3 有待进一步解决的问题
6 参考文献
7 致谢
攻读学位期间发表论文情况



本文编号：3830351