鸡朊蛋白调节DF-1细胞活性的初步研究

发布时间：2023-06-04 19:42

　　【目的】本研究利用鸡朊蛋白过表达DF-1细胞系，与正常DF-1细胞在增殖、粘附、侵袭和凋亡方面的比较，初步探究禽朊蛋白对DF-1细胞的影响；通过检测朊蛋白过表达DF-1细胞与正常DF-1细胞增殖相关蛋白Akt的表达量，并采用渥曼青霉素阻断增殖相关信号转导途径（PI3K/Akt途径），阐明朊蛋白过表达影响DF-1细胞的分子机制，进一步了解禽朊蛋白的生理功能，为研究禽源细胞肿瘤发生提供理论依据。 【方法】（1）根据GenBank中鸡Akt和β-actin基因序列各设计一对引物，经过优化反应条件，建立针对ChAkt mRNA的反转录荧光定量PCR检测方法；将DF-1-PrP、DF-1-cont和DF-1细胞提取总RNA，以该法进行荧光定量PCR扩增，再进行统计分析。（2）在DF-1-PrP、DF-1-cont和DF-1细胞中加入不同浓度渥曼青霉素，作用一段时间后，利用细胞MTT法、流式细胞术、粘附实验和侵袭实验等方法检测朊蛋白与Akt对DF-1细胞增殖、粘附、侵袭和凋亡的影响，并利用实验室建立的PRNP SYBRGreenⅠ双标准曲线荧光定量PCR检测方法，检测在不同渥曼青霉素浓度下朊蛋白的...

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Summary
缩写词英汉对照表
第一章 绪论
    1. 朊蛋白生理功能的研究进展
        1.1 PrPC的生理功能
            1.1.1 PrPC神经系统中的功能
            1.1.2 PrPC在免疫系统中的功能
            1.1.3 PrPC在细胞粘附中的作用
            1.1.4 PrPC和程序性细胞死亡
            1.1.5 PrPC促进体内神经保护作用
                1.1.5.1 PrPC缺失小鼠
                1.1.5.2 PrPC转基因小鼠
            1.1.6 PrPC促进神体外经保护作用
        1.2 PrPC和肿瘤耐受
            1.2.1 TNF 家族介导的细胞凋亡
            1.2.2 Bax 介导的细胞调亡
            1.2.3 紫杉醇介导的细胞调亡
        1.3 PrPC参与的信号转导
    2. PI3K/Akt 信号转导通路的研究进展
        2.1 Akt 的生理功能
            2.1.1 Akt 结构特征
            2.1.2 Akt 的调控
                2.1.2.1 依赖于 PI3K 的 Akt 活化
                2.1.2.2 不依赖于 PI3K 的 Akt 活化
            2.1.3 Akt 的功能
                2.1.3.1 直接调节细胞存活
                2.1.3.2 Akt 对细胞代谢的调控
                2.1.3.3 Akt 对细胞周期的调控
        2.2 PI3K 激酶抑制剂
    3. 研究目的及意义
    4.研究内容和方法
        4.1 鸡 Akt 基因 mRNA 定量 PCR 检测方法的建立与评估
        4.2 渥曼青霉素对鸡 DF-1 细胞与朊蛋白过表达 DF-1 细胞增殖和凋亡的影响
第二章 鸡 Akt 基因 mRNA 的 SYBR GreenⅠ实时定量 RT-PCR 检测方法的建立
    1 材料与方法
        1.1 材料
            1.1.1 细胞与菌株
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 主要仪器
            1.1.4 引物的设计和合成
        1.2 方法
            1.2.1 RNA 的提取
            1.2.2 模板 cDNA 的合成和 PCR 扩增
            1.2.3 标准质粒的构建
            1.2.4 标准曲线的绘制
            1.2.5 重复性和稳定性试验
            1.2.6 不同 DF-1 细胞 Akt 基因表达量的荧光定量 RT-PCR 检测与数据分析
    2 结果与分析
        2.1 电泳检测 PCR 扩增产物与阳性克隆的鉴定
        2.2 标准曲线的建立
        2.3 不同 DF-1 细胞 Akt 基因的表达量
    3 讨论
第三章 渥曼青霉素对鸡DF-1细胞与朊蛋白过表达DF-1细胞增殖和凋亡的影响
    1 材料和方法
        1.1 材料
            1.1.1 细胞
            1.1.2 主要试剂
            1.1.3 主要仪器
        1.2 方法
            1.2.1 细胞培养
            1.2.2 粘附实验
            1.2.3 侵袭实验
            1.2.4 细胞增殖和凋亡检测
                1.2.4.1 MTT 法检测细胞增殖
                1.2.4.2 流式细胞仪检测细胞凋亡
            1.2.5 不同渥曼青霉素浓度下 PrPC的表达量检测
    2 结果与分析
        2.1 渥曼青霉素以剂量依赖方式抑制 DF-1 细胞粘附
        2.2 渥曼青霉素以剂量依赖方式抑制 DF-1 细胞侵袭
        2.3 渥曼青霉素以剂量和时间依赖方式抑制 DF-1 细胞增殖
        2.4 渥曼青霉素以剂量依赖方式促进 DF-1 细胞凋亡
        2.5 不同渥曼青霉素浓度下 PrPC基因的表达差异分析
    3 讨论
结论
致谢
参考文献
作者简介
导师简介



本文编号：3830889