LPS抑制小鼠和肉鸡食欲的机制研究

发布时间：2023-06-04 20:37

　　本试验以LPS诱导的厌食肉鸡为模型，分别对其多条作用通路进行探索试图寻找出一个可以干扰由炎症反应引发的食欲下降的关键因子。下丘脑作为采食调控的关键位置，存在大量的食欲基因和蛋白，试验采用脑室注射的方法，阻断其中一条通路，检测其厌食效果及炎症反应是否被削弱，从而为改善动物采食情况提供理论依据。 试验一：选取体重相近的10日龄AA肉鸡32只随机分为4组，按照肉鸡饲养手册控制湿度和温度，肉鸡可进行自由饮水和采食，单笼单饲。试验前，所有组禁食24h后，分别按照浓度梯度0，0.5，1，2mg/kg体重的剂量腹腔注射LPS。记录24h的采食量及96h的体重变化。结果发现：LPS处理的浓度在0.5mg/kg的时候就足以引起动物采食下降，且采食量在4小时开始与对照组差异显著，随着LPS浓度的增加并未发现存在剂量依赖性。为之后试验的处理剂量和采样时间提供参考。 试验二：选取体重相近的10日龄的双A肉鸡24只，随机分为2组，按照肉鸡饲养手册控制湿度和温度，肉鸡可进行自由饮水和采食，单笼单饲。试验前，所有组禁食24h后，分别按照0，0.5mg/kg体重的剂量腹腔注射LPS。注射LPS4h后，将肉鸡断头，迅速...

【文章页数】：70 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
缩略词（Abbreviations）
中文摘要
Abstract
1 前言
    1.1 LPS 与厌食的关系
        1.1.1 LPS 的结构及特性
        1.1.2 LPS 引起炎症细胞因子的释放
        1.1.3 LPS 与采食中枢
        1.1.4 LPS 作用机制（NF-κB 信号通路）
    1.2 炎症细胞因子
    1.3 采食调控
        1.3.1 下丘脑的采食调控-中枢黑素皮质素系统（CMS）
        1.3.2 外周组织的采食调控
    1.4 调控食欲的信号通路
        1.4.1 AMPK 信号通路
        1.4.2 mTOR 信号通路
        1.4.3 FoxO 信号通路
    1.5 选题目的及意义
2 材料和方法
    2.1 试验材料
        2.1.1 试验动物与日粮
        2.1.2 试验试剂与仪器
    2.2 试验设计
        2.2.1 肉鸡下丘脑 mTOR 通路在 LPS 诱导的厌食中的作用
        2.2.2 激活下丘脑 FoxO1 对 LPS 导致的厌食的调节的机制及研究
    2.3 测定方法
        2.3.1 第三脑室埋管手术
        2.3.2 第三脑室注射
        2.3.3 下丘脑中总蛋白的提取
        2.3.4 Western Blotting 及成像
        2.3.5 下丘脑中总 RNA 的提取
        2.3.6 RNA 反转录成 cDNA
        2.3.7 实时荧光相对定量 PCR
        2.3.8 分离扩增质粒
        2.3.9 质粒 DNA 的提取
        2.3.10 293 细胞的培养
    2.4 数据处理
3 结果分析
    3.1 不同浓度 LPS 对肉鸡厌食水平的影响
        3.1.1 不同浓度 LPS 对肉鸡采食量的影响
        3.1.2 不同浓度 LPS 对肉鸡体增重的影响
    3.2 在 LPS 引起的肉鸡厌食中，激活 NF-κB 信号通路对食欲调节机制的影响
        3.2.1 LPS 腹腔注射对 NF-κB 信号通路的影响
        3.2.2 LPS 腹腔注射对 AMPK 信号通路的影响
        3.2.3 LPS 腹腔注射对 mTOR，P70S6K 信号通路的影响
        3.2.4 LPS 腹腔注射对 FoxO1 信号通路的影响
        3.2.5 LPS 腹腔注射对炎症因子及食欲因子的影响
    3.3 通过中枢注射 Rapamycin 阻断下丘脑 mTOR 信号通路对 LPS 导致的厌食的调节
        3.3.1 阻断 mTOR 通路对 LPS 诱导的采食量下降的影响
        3.3.2 阻断 mTOR 通路后腹腔注射 LPS 对 NF-κB 信号通路的影响
        3.3.3 阻断 mTOR 通路后腹腔注射 LPS 对 mTOR，P70S6K 信号通路的影响
        3.3.4 阻断 mTOR 通路后腹腔注射 LPS 对 FoxO1 信号通路的影响
        3.3.5 阻断 mTOR 通路后腹腔注射 LPS 对炎症因子及食欲因子的影响
    3.4 激活下丘脑 FoxO1 对 LPS 导致的厌食的调节的机制及研究
        3.4.1 过表达 FoxO1 质粒的选择
        3.4.2 脑室注射过表达 FoxO1 腺病毒对采食量的影响
4 讨论
    4.1 腹腔注射 LPS 对肉鸡采食量的影响及炎症因子和食欲基因 mRNA 的表达
    4.2 腹腔注射 LPS 对于相关蛋白表达的影响
        4.2.1 腹腔注射 LPS 对下丘脑 AMPK 的影响
        4.2.2 腹腔注射 LPS 对下丘脑 NF-κB 的影响
        4.2.3 腹腔注射 LPS 对下丘脑 FoxO1 的影响
        4.2.4 腹腔注射 LPS 对下丘脑 mTOR 的影响
    4.3 阻断 mTOR 通路对 LPS 诱导的厌食肉鸡的采食量的影响及炎症因子和食欲基因mRNA 的表达
    4.4 阻断 mTOR 通路对 LPS 诱导的厌食肉鸡相关蛋白的磷酸化水平的影响
        4.4.1 阻断 mTOR 通路对 LPS 诱导的厌食肉鸡 NF-κB 的磷酸化水平的影响
        4.4.2 阻断 mTOR 通路对 LPS 诱导的厌食肉鸡 mTOR 的磷酸化水平的影响
        4.4.3 阻断 mTOR 通路对 LPS 诱导的厌食肉鸡 FoxO1 的磷酸化水平的影响
    4.5 脑室注射过表达 FoxO1 腺病毒对采食量的影响
5 结论与研究前景
    5.1 结论
    5.2 课题创新
    5.3 研究展望
参考文献
致谢



本文编号：3830975