PRMT5对奶山羊体细胞重编程的影响

发布时间：2023-06-16 21:28

　　胚胎干细胞为基因功能、生物发育学以及生理学等研究提供了一个有力的工具。人类胚胎干细胞的出现也为再生医学治疗提供了一个很好的材料和模型，因为胚胎干细胞能够向机体内的几乎所有组织和器官发育与分化。但是，目前大部分哺乳动物如山羊尚没有建系的胚胎干细胞，其严重制约了转基因山羊等技术的快速发展。诱导多能干细胞在小鼠、大鼠和人等动物上的成功，促进了多能性干细胞和转基因动物等研究。但目前，山羊体细胞的重编程效率很低，其体细胞的重编程机制仍然不够清楚，并且可能存在不同于小鼠和人体细胞重编程的特点。 在细胞水平上，蛋白精氨酸甲基转移酶有许多生理功能，它们能够影响细胞分化和发育，生长与增殖。有预测显示，哺乳动物基因组中有占1％的基因编码甲基转移酶，这表明这类酶在体内发挥重要作用。精氨酸甲基转移酶能够对称和不对称甲基化组蛋白和非组蛋白。它们中的大部分成员能够调节染色体结构，并控制一类基因的转录和沉默。与其它蛋白精氨酸甲基转移酶不同，PRMT5能够协同作用于许多蛋白基团，来调节体内、体外的表观遗传改变。已有很多进展显示PRMT5能够调控细胞增殖和促进细胞生存。作为一个调节酶，PRMT5从表观层遗传上发挥着调节...

【文章页数】：63 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
文献综述
    第一章 多能性干细胞及 PRMT5 研究进展
        1.1 多能性干细胞研究进展
            1.1.1 胚胎干细胞
            1.1.2 诱导性多能干细胞研究现状
            1.1.3 奶山羊干细胞相关研究
        1.2 PRMT5 的研究进展
            1.2.1 精氨酸甲基转移酶
            1.2.2 PRMT5 的功能及作用机理
            1.2.3 PRMT5 影响多能性的研究进展
        1.3 小结与展望
试验研究
    第二章 奶山羊 PRMT5 慢病毒载体构建及基因分析
        2.1 材料和方法
            2.1.1 实验动物
            2.1.2 主要仪器设备
            2.1.3 主要试剂
            2.1.4 主要溶液的配制
            2.1.5 PRMT5 在奶山羊不同组织的表达及定位检测
            2.1.6 pCDH-CMV-PRMT5-EF1-GreenPuro 载体构建
            2.1.7 病毒包装及病毒感染后检测
        2.2 结果
            2.2.1 QRT-PCR 检测 PRMT5 在奶山羊不同组织的表达
            2.2.2 PRMT5 在奶山羊睾丸和卵巢组织的表达定位
            2.2.3 载体构建及生物信息学分析
            2.2.4 GEF 细胞超表达 PRMT5 后免疫荧光及半定量检测 PRMT5 表达情况
        2.3 讨论
        2.4 小结
    第三章 奶山羊胚胎成纤维细胞重编程
        3.1 材料和方法
            3.1.1 主要仪器
            3.1.2 主要试剂
            3.1.3 主要溶液配制
            3.1.4 GEF 的分离及慢病毒包装
            3.1.5 不同转染试剂及方法对奶山羊胚胎成纤维细胞转染效果比较
            3.1.6 奶山羊胚胎成纤维细胞重编程
            3.1.7 多能性细胞鉴定
            3.1.8 类胚体生成及向三胚层分化检测
        3.2 结果
            3.2.1 GEF 细胞形态学观察
            3.2.2 不同转染试剂转染奶山羊胚胎成纤维细胞效果比较
            3.2.3 重编程过程不同阶段细胞形态结果
            3.2.4 重编程细胞多能性检测结果
            3.2.5 重编程细胞向三胚层分化的免疫荧光检测结果
        3.3 讨论
        3.4 小结
    第四章 PRMT5 通过影响 P53 信号通路影响重编程
        4.1 材料和方法
            4.1.1 GEF 细胞超表达 PRMT5
            4.1.2 RT-PCR 检测
            4.1.3 细胞周期检测
            4.1.4 Western Blot 检测
            4.1.5 超表达 PRMT5 对 GEF 重编程时细胞 AP 阳性率的检测
            4.1.6 超表达 PRMT5 细胞对克隆形成的影响
            4.1.7 P53 抑制剂对细胞增殖和 PRMT5 表达量的影响
        4.2 结果
            4.2.1 细胞形态观察
            4.2.2 细胞周期结果
            4.2.3 PCR 和 QRT-PCR 结果
            4.2.4 Western Blot 结果
            4.2.5 超表达 PRMT5 对诱导山羊胚胎成纤维细胞的影响
            4.2.6 P53 抑制剂能够促进细胞增殖，并且能够降低 PRMT5 的表达
        4.3 讨论
        4.4 小结
结论
本文研究的创新点及进一步研究的课题
    创新点
    进一步研究课题
参考文献
致谢
作者简介及研究生期间工作进展



本文编号：3834016