禽呼肠孤病毒σA蛋白与宿主蛋白HSP70、HSP40和RPL4相互作用的初步研究

发布时间：2023-06-18 04:22

　　禽呼肠孤病毒(Avian reovius,ARV)属于正呼肠孤病毒科(Reoviridae),正呼肠孤病毒属(Orthoreovirus)。ARV感染鸡引起的主要病症有鸡的病毒性关节炎、腱鞘炎及矮小综合征等,除导致死亡和生产性能下降之外,该病还可诱发免疫抑制,导致机体对疫苗的免疫应答和多种病原体的抵抗能力显著降低。由此可见,ARV感染对养禽业的危害极大,给养禽业者造成了巨大的经济损失。ARV是一种不含囊膜的双链RNA病毒,其基因组由10个RNA基因片段组成,可以编码病毒的八种结构蛋白(λA、λB、λC、μA、μB、σA、σB和σC)及四种非结构蛋白(μNS、σNS、p10和p17)。其中,σA蛋白是由S2基因编码,介于外衣壳μBC蛋白和内衣壳λA蛋白之间的结构蛋白,它能够促进ARV内、外层衣壳结构的稳定。σA蛋白可以通过与dsRNA序列相结合的方式来抑制蛋白酶的活化过程,从而抑制细胞内干扰素的分泌,协助病毒粒子躲避宿主细胞内的免疫防御;在病毒侵染的过程中,σA蛋白可以通过其水解酶的活性作用作为病毒转录和复制的能量来源;σA蛋白还可以对宿主细胞内的信号通路进行调节,促进病毒在宿主细胞内的...

【文章页数】：66 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略词表
第一章 文献综述
    1.1 禽呼肠孤病毒简介
        1.1.1 禽呼肠孤病毒的基本特征
        1.1.2 禽呼肠孤病毒病毒的结构特征
        1.1.3 禽呼肠孤病毒的复制
        1.1.4 禽呼肠孤病毒的研究进展
        1.1.5 禽呼肠孤病毒主要蛋白的简介
    1.2 热休克蛋白及其与病毒相互作用的研究进展
        1.2.1 热休克蛋白HSP70及其与病毒相互作用的研究进展
        1.2.2 热休克蛋白HSP40及其与病毒相互作用的研究进展
    1.3 核糖体蛋白L4(RPL4)及其与病毒相互作用的研究进展
    1.4 免疫共沉淀技术在蛋白质研究中的应用
    1.5 本研究的目的意义
第二章 禽呼肠孤病毒σA基因和禽源HSP70、HSP40、RPL4基因真核表达重组质粒的构建
    2.1 材料
        2.1.1 主要试验试剂
        2.1.2 主要试验仪器
        2.1.3 主要试验试剂的配置
        2.1.4 引物
    2.2 试验方法
        2.2.1 pMD-18T-HSP70、pMD-18T-HSP40(DNAJB6)、pMD-18T-RPL4重组载体的构建
        2.2.2 pMD-18T-σA重组载体的构建
        2.2.3 pEF1α-HA-σA、pEF1α-Myc-HSP70、pEF1-Myc-HSP40(DNAJB6)、pEF1α-Myc-RPL4真核表达重组质粒的构建
    2.3 试验结果
        2.3.1 目的基因的PCR扩增结果
        2.3.2 目的基因连接pMD-18T的阳性克隆筛选结果
        2.3.3 真核表达重组质粒的阳性克隆筛选结果
        2.3.4 真核表达重组质粒的双酶切验证结果
    2.4 分析与讨论
第三章 禽呼肠孤病毒σA基因和禽源HSP70、HSP40、RPL4蛋白的表达和验证
    3.1 材料
        3.1.1 试验材料
        3.1.2 主要试验试剂
        3.1.3 主要试验仪器
        3.1.4 主要试验试剂的配置
    3.2 试验方法
        3.2.1 IFA验证目的蛋白的表达
        3.2.2 Western blot验证目的蛋白的表达
    3.3 试验结果
        3.3.1 间接免疫荧光检测目的蛋白的表达结果
        3.3.2 Western blot检测目的蛋白的表达结果
    3.4 分析与讨论
第四章 禽呼肠孤病毒σA基因和禽源HSP70、HSP40、RPL4蛋白相互作用的验证
    4.1 材料
        4.1.1 主要试验试剂
        4.1.2 主要试验仪器
        4.1.3 主要试验试剂的配置
    4.2 试验方法
        4.2.1 免疫共沉淀(Co-IP)
        4.2.2 Western blot检测蛋白的相互作用
    4.3 试验结果
    4.4 分析与讨论
全文结论
参考文献
致谢
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本文编号：3834771