鸭细小病毒SD株分离与鉴定及基因组特征分析

发布时间：2023-06-27 21:35

　　“鸭短喙-侏儒综合征”(Beak atrophy and dwarfism syndrome,BADS)是一种以雏鸭发育不良、喙萎缩变形、舌外伸肿胀和骨质疏松为主要特征的传染病。自2014年11月以来,该病在我国东南多省的商品肉鸭群中发生并流行,给我国鸭养殖业造成了严重的经济损失。本研究旨在从流行病学与病原学角度出发,分离相关病原进行致病性分析,明确引发BADS的病因,并建立病原实验室检测方法,探究致病病原的相关特性,为该病的防控提供理论依据及技术支持。本文主要从以下三个方面进行论述:首先,为了探究BADS的致病原因,本研究对发生BADS病鸭的肝脏和脾脏进行了PCR/RT-PCR检测,排除了其他的鸭常见疫病,将该病的病原命名为鸭细小病毒(Duck parvovirus,DPV)。将阳性病料研磨液接种鸭胚,盲传5代,收获尿囊液,通过PCR检测、测序鉴定、同源进化分析、动物回归试验,最终确定本研究成功分离到了一株DPV(命名为DPV SD)。此外,本研究还利用鸭胚成纤维细胞(Duck embryo fibroblasts,DEF)对病毒进行了分离培养,PCR和间接免疫荧光试验(Indire...

【文章页数】：60 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要 abstract 1 引言
1.1 水禽细小病毒病原学研究进展
    1.1.1 分类地位
    1.1.2 形态特征及理化特性
    1.1.3 宿主范围及培养特性
    1.1.4 分子生物学特征
1.2 水禽细小病毒流行病学研究进展
    1.2.1 主要临床症状及病理变化
    1.2.2 诊断方法
    1.2.3 防制
1.3 研究目的及意义 2 材料与方法
2.1 材料
    2.1.1 病毒、临床样品和实验动物
    2.1.2 主要分子生物学试剂和常用生化试剂
    2.1.3 细胞培养溶液
    2.1.4 工程菌培养及质粒转化用溶液
    2.1.5 主要仪器
2.2 方法
    2.2.1 病原的PCR检测及纯净性检测
    2.2.2 SD株鸭胚毒的分离与鉴定
    2.2.3 动物回归试验
    2.2.4 SD株细胞毒的分离与鉴定
    2.2.5 SD株全基因组各片段重组质粒的构建
    2.2.6 SD株全基因组序列的拼接及分析
    2.2.7 荧光定量PCR引物及探针的设计
    2.2.8 PCR反应体系的优化及标准曲线的绘制
    2.2.9 荧光定量PCR检测方法的验证 3 结果与分析
3.1 DPVSD株的分离与鉴定
    3.1.1 发病鸭的流行病学及临床特征
    3.1.2 病原PCR检测及纯净性检测结果
    3.1.3 鸭胚分离毒PCR鉴定结果
    3.1.4 EID50测定结果
    3.1.5 动物回归试验结果
    3.1.6 细胞分离毒PCR鉴定结果
    3.1.7 细胞分离毒IFA检测结果
3.2 DPVSD株全基因组序列的测定与分析
    3.2.1 各片段PCR电泳结果
    3.2.2 全基因组序列特征分析
    3.2.3 NS基因序列特征分析
    3.2.4 VP基因序列特征分析
    3.2.5 ITR区序列特征分析
    3.2.6 潜在糖基化位点预测分析
3.3 DPVTaq-Man实时荧光定量PCR检测方法的建立
    3.3.1 Taq-Man实时荧光定量PCR引物的验证
    3.3.2 标准品的制备
    3.3.3 反应体系的优化结果
    3.3.4 标准曲线的绘制
    3.3.5 特异性试验结果
    3.3.6 敏感性试验结果
    3.3.7 重复性试验结果
    3.3.8 临床样品检测结果 4 讨论
4.1 DPVSD株的分离与鉴定
4.2 DPVSD株基因组全序的测定与分析
4.3 DPVTaq-Man实时荧光定量PCR检测方法的建立 5 结论 参考文献 在读期间发表的学术论文 作者简介 致谢 中文详细摘要



本文编号：3835375