PI3K/Akt信号通路与山羊黄体细胞孕酮分泌的相关性研究

发布时间：2023-08-01 17:44

　　探讨外源性加入一定浓度的血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)与细胞膜上的VEGFR-2受体结合后激活PI3K/Akt信号通路后与永生化黄体细胞的体外增殖存活及孕酮分泌之间的相关性,揭示VEGF/VEGFR-2/PI3K/Akt信号途径在黄体细胞增殖存活和在孕酮分泌过程中起到的重要作用。本试验采用永生化黄体细胞和脐静脉内皮细胞进行数量比例近似1:1的方式共培养以及单独黄体细胞培养,采用MTT法检测细胞增殖存活情况,并运用ELISA试剂盒双抗夹心法检测不同细胞样品中分泌孕酮的含量变化,同时用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)分析孕酮合成过程中三种特异性标志酶:3β-HSD、P450scc和STAR1mRNA表达量的变化。本试验所得结果如下:1、一定浓度的外源性VEGF(50ng/ml)对共培养细胞的增殖存活有明显的促进作用,在24h和48h两个时间点均对共培养细胞的增殖存活起到促进作用,表现为差异显著(P<0.01)。2、不同浓度的外源性LY294002与一定浓度的外源性VEGF联合给药组可以显著抑制共培养细胞的增殖存...

【文章页数】：51 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
文献综述
    第一章 黄体研究进展
        1.1 黄体的形成
        1.2 黄体的退化
            1.2.1 黄体的功能性退化
            1.2.2 黄体的结构性退化
        1.3 黄体的功能与调节
            1.3.1 黄体的分泌功能
            1.3.2 黄体的调控功能
        1.4 黄体分泌孕酮的分子调控机制
            1.4.1 孕酮分泌的慢调节
            1.4.2 孕酮分泌的快调节
        1.5 弥散性神经内分泌细胞标志物
        1.6 展望
    第二章 VEGF及其受体研究进展
        2.1 VEGF家族及其功能
        2.2 VEGF受体家族及其特性
        2.3 VEGF与黄体功能的关系
        2.4 VEGF与生殖调控的关系
            2.4.1 子宫的血管生成及调节
            2.4.2 胎儿的血管生成及调节
            2.4.3 生殖激素对血管生成因子的调控
        2.5 展望
    第三章 PI3K-Akt信号通路的研究进展
        3.1 PI3K-Akt信号通路的组成与结构
        3.2 PI3K-Akt信号通路的活化与功能
            3.2.1 在细胞周期中的作用
            3.2.2 在细胞凋亡中的作用
            3.2.3 在维持血糖平衡中的作用
            3.2.4 相关癌症研究
            3.2.5 PI3K-Akt与HPG轴以及生殖关系
        3.3 PI3K-Akt-e NOS信号通路研究进展
        3.4 PI3K-Akt通路抑制剂家族及其功能
        3.5 展望
试验研究
    第四章 PI3K/Akt细胞信号传导通路对永生化山羊黄体细胞存活的影响
        4.1 材料
            4.1.2 主要仪器与试剂
            4.1.3 主要试剂的配制
        4.2 方法
        4.3 结果
            4.3.1 不同浓度PI3K抑制剂LY294002对单独培养黄体细胞增殖的影响
            4.3.2 不同浓度PI3K抑制剂LY294002与VEGF联合给药对单独培养黄体细胞增殖的影响
            4.3.3 不同浓度PI3K抑制剂LY294002与VEGF联合给药对共培养细胞增殖的影响
        4.4 讨论
        4.5 小结
    第五章 PI3K/Akt细胞信号传导通路对永生化山羊黄体细胞分泌孕酮的影响
        5.1 材料
        5.2 方法
            5.2.1 细胞样本及培养液的收集
            5.2.2 ELISA试验
            5.2.3 提取Total RNA
            5.2.4 反转录
            5.2.5 引物设计
            5.2.6 RT-PCR
        5.3 结果
            5.3.1 孕酮检测干扰因素排除试验
            5.3.2 不同浓度PI3K抑制剂LY294002对单独培养黄体细胞孕酮分泌的影响
            5.3.3 不同浓度PI3K抑制剂LY294002与VEGF联合给药对单独培养黄体细胞孕酮分泌的影响
            5.3.4 不同浓度PI3K抑制剂LY294002与VEGF联合给药对共培养细胞孕酮分泌的影响
            5.3.5 RT-PCR实验结果
        5.4 讨论
        5.5 小结
结论
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3838061