黄花苜蓿MfNAC63基因的克隆及特性分析

发布时间：2023-08-01 19:48

　　黄花苜蓿在抗干旱、抗寒冷、耐盐等方面的优良抗逆性,使其成为培育优良品种的重要种质资源和基因库。NAC转录因子广泛参与了植物的各项生理活动,在植物适应逆境胁迫中发挥重要的作用。本研究以转录组数据为基础,克隆获得了1个序列全长为756 bp的野生黄花苜蓿NAC转录因子基因Mf NAC63,其编码251个氨基酸,分子量(Mw)为29.07 k Da。生物信息学分析发现其编码蛋白在1-75位氨基酸处有NAM结构域,属于NAC转录因子家族成员,且NAM结构域具有A、B、C、D和E五个亚结构域,并在亚结构域D含有核定位信号。经预测Mf NAC63无跨膜结构域和信号肽,有65.2%的概率定位在细胞核内。以p CAMBIA1300(35S-s GFP)为骨架,构建瞬时表达载体p CAMBIA1300(35S-Mf NAC63-s GFP),注射烟草下表皮细胞后,利用激光显微镜进行观察,发现Mf NAC63定位在细胞核内。同时,验证了Mf NAC63在酵母中具有转录激活功能,且功能域位于蛋白的C端。Mf NAC63在野生黄花苜蓿的根、茎和叶中均有表达,且在叶中的表达量最高,同时其表达受盐或干旱胁迫调节,...

【文章页数】：58 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略词对照表
一 引言
    1 黄花苜蓿研究概况
        1.1 黄花苜蓿地理分布及生长环境
        1.2 黄花苜蓿优良特性
    2 植物NAC转录因子研究概况
        2.1 NAC转录因子结构
        2.2 NAC转录因子生物学功能
    3 研究的目的及意义
二 实验材料与方法
    1 实验材料与试剂
        1.1 植物材料
        1.2 菌种
        1.3 质粒
        1.4 试剂
        1.5 引物
    2 实验方法
        2.1 PCR扩增
        2.2 生物信息学分析
        2.3 亚细胞定位
        2.4 转录激活功能验证
        2.5 基因表达分析
        2.6 遗传转化
        2.7 转化拟南芥的筛选
三 结果
    1 基因克隆
        1.1 PCR扩增
        1.2 克隆结果测序分析
    2 生物信息学分析
        2.1 系统发育树的构建
        2.2 蛋白质结构预测
        2.3 MfNAC63蛋白质一级结构预测
        2.4 MfNAC63蛋白质的二级结构预测
        2.5 MfNAC63蛋白质的三级结构预测
        2.6 MfNAC63蛋白质疏水性预测
        2.7 MfNAC63的信号肽及跨膜结构域预测
        2.8 MfNAC63亚细胞定位预测
    3 亚细胞定位验证
        3.1 重组质粒的构建
        3.2 转化农杆菌GV3101感受态细胞
        3.3 MfNAC63亚细胞定位结果
    4 转录激活功能验证
        4.1 重组质粒的构建
        4.2 重组质粒转化酵母菌AH109
        4.3 MfNAC63转录激活功能验证
    5 MfNAC63基因表达分析
    6 遗传转化
        6.1 重组质粒的构建
        6.2 转化农杆菌AGL1结果
        6.3 转化紫花苜蓿
        6.4 花序浸染法转化拟南芥
四 讨论与结论
    1 讨论
    2 结论
参考文献
致谢



本文编号：3838247