羊驼MC1R真核表达载体的构建及其在毛囊干细胞中的表达

发布时间：2023-08-02 20:31

　　黑色素皮质激素受体1(melanocortin-1 receptor,MC1R)基因在哺乳动物毛色调控过程中起重要作用,但外源MC1R基因对羊驼(Lama pacos)毛囊干细胞(hair follicle stem cells,HFSCs)中小眼畸形相关转录因子(micropht-halmiaassocitated transcription factor,MITF)和酪氨酸酶(tyrosinase,TYR)基因表达特性的影响研究较少。为了探讨MC1R基因对MITF和TYR mRNA表达的影响,本研究通过构建羊驼MC1R真核表达载体pcDNA3.1(+)-MC1R,瞬时转染HFSCs,qRT-PCR检测转染前后MC1R、MITF、TYR mRNA表达量;并采用细胞免疫化学技术对MC1R进行细胞定位。qRT-PCR结果显示,羊驼HFSCs转染pcDNA3.1(+)-MC1R后,MC1R mRNA表达量显著增加(P<0.05),分别是空载体组和对照组的2.15和2.26倍,MITF和TYR mRNA表达量增加不显著(P>0.05);细胞免疫化学结果显示,MC1R在羊驼HFSC...

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【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料与试剂
    1.2 MC1R基因的克隆
    1.3 pc DNA3.1(+)-MC1R重组克隆载体的构建
    1.4 pc DNA3.1(+)-MC1R转染羊驼HFSCs
    1.5 q RT-PCR检测MC1R、MITF、TYR m RNA表达
    1.6 MC1R细胞免疫化学定位
    1.7 数据处理与图像分析
2 结果与分析
    2.1 羊驼MC1R全长基因的获取
    2.2 质粒pc DNA3.1(+)-MC1R构建及双酶切鉴定
    2.3 q RT-PCR检测转染前后相关基因表达
    2.4 MC1R蛋白的细胞表达定位
3 讨论
    3.1 载体pc DNA3.1(+)-MC1R质粒构建结果
    3.2 转染质粒对羊驼HFSCs黑色素相关基因的影响
    3.3 MC1R基因在羊驼HFSCs中的定位
4 结论



本文编号：3838487