布雷非德菌素A引起的内质网应激在小鼠卵母细胞分裂成熟中的作用

发布时间：2023-08-08 17:37

　　母细胞分裂成具有不同细胞命运的两个子细胞称为细胞的不对称分裂,对于产生多样性发育至关重要。哺乳动物雌性减数分裂通过两轮连续的不对称细胞分裂产生一个单倍体卵子和两个小极体。这种不对称的细胞分裂是通过不对称的纺锤体定位产生的。通过这种不对称分裂卵母细胞完成自身极性建立,这对于早期胚胎极性的确定是至关重要的。这个过程需要微管蛋白,肌动蛋白以及多种极性蛋白协作调控。内质网作为细胞内最大的膜细胞器参与多种蛋白质的合成以及加工修饰,当内质网应激时,多种蛋白合成加工受阻,这会导致卵母细胞发育受阻。布雷非德菌素A(Brefeldin A,BFA)可以抑制从内质网到高尔基体的蛋白转运,是内质网应激的诱导剂,同时它可以破坏卵母细胞的不对称分裂。本实验以小鼠卵母细胞为材料,在BFA处理下破坏小鼠不对称分裂,通过荧光定量PCR技术检测出应激标志分子上调,因此,我们认为小鼠卵母细胞不对称分裂的破坏可能与内质网应激有关。随后我们克隆了在内质网应激中有缓解作用的应激因子钙网蛋白(Calreticulin,CRT)基因,构建了pCRT-Venus重组质粒。通过体外转录技术及显微操作技术将其在卵母细胞中过表达,通过统计...

【文章页数】：55 页

【学位级别】：硕士

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摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 哺乳动物卵母细胞减数分裂成熟的分子机制
        1.1.1 纺锤体的组装、定位与迁移
        1.1.2 皮质肌动蛋白帽的形成
        1.1.3 收缩环
        1.1.4 皮质颗粒
        1.1.5 染色体的分离
        1.1.6 减数分裂过程中,一些极性蛋白的作用
        1.1.7 减数分裂异常的卵母细胞
    1.2 内质网应激研究进展
        1.2.1 内质网应激信号通路
        1.2.2 钙网蛋白在内质网应激中的作用
    1.3 内质网应激对卵母细胞成熟的影响
        1.3.1 ER应激和UPR信号在卵母细胞成熟以及早期胚胎发育中作用。
        1.3.2 钙网蛋白对卵母细胞激活的影响
第二章 布雷菲德菌素A对小鼠卵母细胞分裂成熟的影响
    2.1 材料及设备
        2.1.1 试验材料
        2.1.2 试验设备
    2.2 方法
        2.2.1 对照组小鼠卵母细胞的收集与培养
        2.2.2 BFA处理组小鼠卵母细胞
        2.2.3 免疫荧光染色
        2.2.4 实时荧光定量PCR
    2.3 实验结果处理与分析
        2.3.1 BFA处理导致卵母细胞极性分裂被破坏
        2.3.2 不同时间点去除BFA胞质分裂恢复情况
        2.3.3 BFA破坏小鼠卵母细胞中纺锤体的迁移
        2.3.4 BFA破坏小鼠卵母细胞中p-MAPK纺锤体极点分布
        2.3.5 BFA对小鼠卵母细胞中极性蛋白的作用
        2.3.6 BFA导致内质网应激标志分子上调
    2.4 讨论
    2.5 小结
第三章 钙网蛋白在内质网应激中的作用
    3.1 材料及设备
        3.1.1 试验材料
        3.1.2 试验设备
    3.2 方法
        3.2.1 钙网蛋白重组质粒的构建
        3.2.2 体外转录及显微注射CRT重组质粒
    3.3 实验结果处理与分析
        3.3.1 应激蛋白CRT重组质粒的构建及显微注射
        3.3.2 显微注射CRT对卵母细胞成熟的影响
    3.4 讨论
    3.5 小结
第四章 结论
本课题创新点与进一步研究计划
参考文献
致谢
作者简介



本文编号：3840189